CIP2A促进神经母细胞瘤侵袭、转移的机制研究

CIP2A is an endogenous inhibitor of the anti-oncogene PP2A, playing important roles in maintaining the malignant phenotype and promoting tumor formation, metastasis, transformation and other processes. In neuroblastoma, high CIP2A expression is identified as a novel NMYC-independent marker with poor prognosis. However, its functions and mechanisms are still unclear. In our study, we found that CIP2A was highly expressed in neuroblastoma especially in poor differentiated tissues, and correlated with lymph node metastasis positively. Silencing CIP2A in neuroblastoma cell lines inhibited the abilities of migration and invasion. These results suggested that CIP2A plays important roles in tumor invasion, metastasis and stemness. In this program, we will further explore the distinctions of CIP2A between neuroblastoma stem and differentiated cells, and the biological effects of CIP2A by establishing the overexpression/interference system in neuroblastoma cell lines. Otherwise, we have screened the stemness related microRNA down-streaming to CIP2A by tagman PCR and interacting proteins of CIP2A by mass spectrum analysis for further molecular mechanism studies. In general, the achievement of this program is to establish the theory basis for clinical diagnosis, prognosis and therapy of neuroblastoma.

CIP2A是抑癌基因PP2A的内源性抑制物，在维持细胞恶性表型、促进肿瘤形成、转移、转化等过程中发挥着重要作用。在神经母细胞瘤患者中，CIP2A高表达可作为一个独立于N-myc的预后不良因素，然其功能尚未见报道。我们研究发现，CIP2A在神经母细胞瘤组织中高表达，且与分化程度成负相关，与淋巴结转移成正相关。在神经母细胞瘤细胞系中干扰CIP2A后，可抑制细胞的迁移、侵袭能力。这些结果提示了CIP2A在神经母细胞瘤侵袭、转移、干性调控中起着重要作用。本课题旨在通过对CIP2A在神经母细胞瘤干细胞和分化细胞中表达差异的研究，在神经母细胞瘤细胞中建立CIP2A过表达/干扰系统，研究其生物学效应（包括干细胞效应）。此外，我们还通过筛选CIP2A下游干细胞相关microRNA及CIP2A相互作用蛋白，探索CIP2A在神经母细胞瘤中上、下游相关信号调控的分子机制，为临床诊断、预后评估及治疗提供科学依据。

CIP2A是抑癌基因PP2A的内源性抑制物，在多种肿瘤细胞中高表达，对维持细胞恶性表型、促进肿瘤形成、转移等功能起着重要作用。然而，在神经母细胞瘤中，其功能和机制尚未见报道。我们研究发现，与节细胞瘤、节神经母细胞瘤相比，CIP2A在神经母细胞瘤中高表达，且与临床分期呈正相关，是一个独立于MYCN的预后不良因素；COX分析也显示，CIP2A高表达患者复发、死亡风险明显高于低表达组。在神经母细胞瘤细胞系中干扰CIP2A后，可抑制细胞生长、迁移、侵袭、成瘤等能力，而过表达CIP2A后，可促进其侵袭、成瘤等功能。此外，我们通过Real-time PCR筛选出miR-200c可能为CIP2A的下游调控基因，并通过分析miR-200c启动子区，选取其转录因子STAT2作为研究对象。通过Co-IP、双荧光素酶报告系统、ChIP等实验，证明了在神经母细胞瘤细胞中，CIP2A通过与转录因子STAT2结合，抑制其转录激活miR-200c，从而上调ZEB1基因表达，促进神经母细胞瘤转移。以上结果阐明了CIP2A在神经母细胞瘤中的表达意义、功能及分子机制，填补了CIP2A在神经母细胞瘤中研究的空白，为神经母细胞瘤临床诊断、治疗以及预后评估提供了实验基础和科学依据，为基于CIP2A蛋白的肿瘤靶向治疗奠定了坚实的基础。