LC-MS导向分离米碎花中酚酸苷和酯类化合物及其基于PI3K/Akt信号通路的抗肝纤维化活性探讨

Activated HSC is a key object in the treatment of hepatic fibrosis. Therefore the development of novel targeted drugs to inhibit the activation and proliferation of HSC is an urgent project in the relevant field. PI3K/Akt is considered as a crucial signaling pathway to promote the activation and proliferation of HSC, representing a potential therapeutic target for liver fibrosis. In our previous study, seven new phenolic acid glycosides and esters were identified from Eurya chinensis by LC–MS guided isolation. Compound MCH-1 showed strong inhibitory activity against the activation and proliferation of TGFβ mediated human hepatic stellate cell line LX-2. The preliminary mechanism study revealed that the anti-hepatic fibrosis activity of MCH-1 was based on the inhibition of the PI3K/Akt signaling pathway via reducing the phosphorylation of Akt and P70S6. With the promising results in hand, we will continue screening for potential lead compound from more phenolic acid glycosides and esters obtained by LC–MS guided isolation and try to fully elucidate the molecular mechanism underlying the regulation of PI3K/Akt signaling pathway, which might pave ways for the development of novel anti-fibrosis targeted drugs to inhibit the activity and proliferation of HSC.

活化的HSC（肝星状细胞）是治疗肝纤维化中重要的研究对象，开发靶向抑制HSC活化与增殖的新型药物是抗肝纤维化药物研究领域亟待解决的课题。PI3K/Akt信号通路是促进HSC活化与增殖的重要途径，已成为治疗肝纤维化的重点靶点之一。本课题组在前期工作中运用LC–MS从米碎花中导向分离获得7个新型酚酸苷和酯类化合物，并发现新型酚酸苷MCH-1能显著抑制TGFβ介导人肝星状细胞LX-2的活化与增殖；初步的作用机制研究显示，该化合物通过减少Akt和P70S6K的磷酸化，抑制PI3K/Akt通路而发挥抗肝纤维化活性。本项目拟在前期工作基础上，进一步通过LC–MS导向分离米碎花中新型酚酸苷和酯类化合物，评价其抑制TGFβ介导LX-2活化与增殖的活性，并筛选出具有潜在抗肝纤维化活性的先导化合物，同时深入阐明其对PI3K/Akt通路的调控机制，为开发靶向抑制LX-2活化与增殖的新型抗肝纤维化药物提供可能性。

本项目运用LC–MS联用技术，从米碎花中导向分离和富集结构类型多样的酚酸苷和酯类化合物，丰富酚酸苷和酯类化合物的结构类型，同时丰富米碎花及柃木属植物的化学成分研究；并揭示米碎花中不同结构类型的酚酸苷和酯类化合物抑制TGFβ介导LX-2活化与增殖的抗纤维化活性；同时阐明高活性化合物对LX-2活化与增殖的重要信号通路PI3K/Akt的调控机制；最终获得具有显著抑制TGFβ介导LX-2活化与增殖药理活性的酚酸苷和酯类化合物，为新型抗肝纤维化药物研究提供靶点清楚、机制明确的先导化合物，同时为弥补当前社会缺乏有效治疗肝纤维化药物的空白提供可能性。. 项目已从米碎花中分离鉴定32个酚酸苷和酯类化合物，其中结构新颖的化合物14个，并发现化合物chinensiside B具有显著的抗肝纤维化活性，同时明确了该化合物的抗肝纤维化活性机制。在化合物chinensiside B对CCl4诱导的肝纤维化小鼠的保护作用研究中，发现化合物chinensiside B可以一定程度上减轻CCl4对肝脏组织结构的破坏；下调炎症因子的水平；减轻纤维组织的累积并且恢复与肝功能相关的一系列生理指标。在化合物chinensiside B作用机制研究中，通过研究TGF-β1刺激HSC-T6的细胞模型与CCl4构建的肝纤维化小鼠模型，发现化合物chinensiside B能够调控Akt-Nrf2-Smad信号通路从而发挥其抑制HSC活化和肝纤维化进展的作用。因此，化合物chinensiside B能够通过调控Akt-Nrf2-Smad信号通路发挥抗肝纤维化作用，有潜力进一步发展为治疗肝纤维化的候选药物。. PI3K/Akt信号通路是促进HSC活化与增殖的重要途径，对于HSC的增殖与胶原合成具有很重要的作用。研究表明，在TGFβ的刺激下，PI3K和Akt会发生磷酸化而激活引起HSC活化，并调节下游如Bax、Bcl-2等基因调控细胞凋亡。mTOR作为Akt下游靶标，在TGFβ介导的PI3K/Akt通路中起着重要作用，可调控细胞的迁移能力。而核糖体蛋白激酶P70S6K，在各种组织中广泛存在，参与细胞信号转导，能促进细胞的生长和增殖，在HSC增殖、胶原表达和细胞周期调控中起着重要作用。因此，阻断PI3K/Akt信号通路，成为肝纤维化的重要治疗策略之一。