连接蛋白Cx43在多发性骨髓瘤成骨细胞巢重塑中的作用

多发性骨髓瘤（MM）中具有干细胞群体定居于成骨细胞（OBs）巢（Niche）,是肿瘤的发生和发展的关键,近年倍受关注。Cx43是一种重要的细胞间隙连接蛋白。我们的前期研究发现OBs主要表达Cx43,并支持MM细胞生长，抑制地塞米松诱导的细胞调亡。可能与BOs和MM干细胞相互作用有关，但确切机制尚需进一步探讨。鉴此，本研究以OBs巢为切入点，Cx43为靶分子，采用流式细胞术、实时定量PCR、Elisa及Western blot等方法分析OBs在MM细胞生存及增殖中的作用，尤其是细胞相互作用过程中Cx43表达对MM生存、增殖及细胞因子分泌的影响，在此基础上，建立Balb/c-nu-hu小鼠MM模型，免疫荧光或组化等方法观察Cx43对MM细胞体内分布、迁移及增殖的作用，探讨MM细胞归巢骨髓后对OBs细胞巢的重塑，从不同角度探讨MM的发病机制，并寻找新的靶分子。

多发性骨髓瘤（MM）以恶性浆细胞在骨髓中克隆性增殖和堆积为特征，MM细胞通过粘附分子直接或细胞因子自分泌/旁分泌的间接作用促进其生存和增殖，并上调抗凋亡信号。由跨膜通道组成的间隙连接是细胞间相互交流途径之一，促进细胞间小分子物质的交换，它可使相邻细胞的胞浆相互流动。现有的研究证实间隙连接产生的信号交流在多种细胞的增殖中发挥作用包括骨细胞。然而，Cx43在MM细胞增殖和生存中的作用仍尚阐明。鉴此，本研究似分析MM细胞是否可通过GJIC与成骨细胞(OBs）相互作用、MM介导的GJIC是否促进MM细胞的生存和增殖，并探讨其可能机制。由于OBs为分化成熟细胞，增殖能力弱，不能在体外大量培养，为使体外实验结果稳定、可靠，我们对比了OBs及其前体细胞（pre-OBs），证实它们之间生长特性也相似，故实验中均采用pre-OBs。.本研究中我们分析了MM细胞及pre-OBs的Cx43表达及由其形成的间隙连接，在3个MM细胞株（RPMI 8226、U266和XG7）及新鲜分离的MM患者的MM细胞，干细胞样MM细胞（SP细胞）及pre-OBs细胞中Cx43的表达情况，结果发现所有检测的MM细胞株即RPMI 8226、U266和XG7均有Cx43表达，而SP细胞则不表达Cx43分子，而检测的7例MM患者的新鲜标本中有5例表达Cx43。与正常对照相比从MM患者骨髓中分离的Pre-OBs细胞高表达Cx43分子，染料转移试验证实MM与pre-OBs间可通过Cx43分子形成有效的GJIC，染料转移可被庚醇抑制。三维培养发现共培养后4小时MM细胞即可迁移进入pre-OBs球，并随时间延长而增多，加入庚醇后受抑。动物在体研究发现阻断MM细胞与pre-OBs间的GJs，可影响肿瘤植入，无论是小鼠皮下或移植骨腔内接种其肿瘤形成均小于未处理的小鼠，由此证实MM细胞与OBs间的GJIC是功能性能的。本研究还发现对地塞米松或硼替佐米敏感的MM细胞与pre-OBs共培养后，MM细胞对该类药物的敏感性显著下降，但加入间隙连接抑制剂—庚醇后可部分恢复其敏感性。值得注意的是联合使用粒系集落刺激性因子（G-CSF）后，可抑制pre-OBs分泌SDF-1，并显著上调硼替佐米的作用。本研究证实MM与pre-OBs形成的GJIC在MM生存及药物敏感中发挥关键作用，并可能与MM的复发有关。