真菌感染加重慢性移植物抗宿主病的抑制性免疫调节机制研究

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HCT) is a curative therapy for hematological malignancies. Graft-versus-host disease (GVHD) is a serious complication of allo-HCT.Infection, of which invasive fungal infections are one of the most common type, can usually be seen after allo-HCT. Both clinical and experimental studies have found that infection can augment GVHD. However, the relationship and the mechanism between chronic GVHD and fungal infection are still largely unknown. We've published an MHC-matched mouse GVHD model (H2d to H2d), donor DBA / 2 splenocytes into myeloablative total body irradiated BALB/c recipients, the recipients showed symtoms that were known as chronic GVHD . The chronic GVHD severity is associated with the percentage and yield of donor regulatory T cells (Tregs). Transfusion of donor Treg can inhibit donor T-cell proliferation, reduce target tissue damage and reduce GVHD. Our preliminary experement data showed that injection of zymosan exacerbates cGVHD. Zymosan led to Treg reduction, resulting in severe inflammation and tissue damage.In this model, the machenism is still unknown.In this study, based on the data and mouse model, by using Flow, sorting, ELISA,and immunohistopathology, we want to find out how fungal infections augment chronic GVHD.Also,by study of this novel animal model, we can further understand the machenism of transplantation tolerance and have a further insight of the treatment of fungal infection and GVHD by infusion of donor Treg in clinic.

异基因造血干细胞移植（allo-HCT）可以根治恶性血液病。移植物抗宿主病（GVHD）是移植后的严重并发症。移植后感染，特别是侵袭性真菌感染，在临床上十分常见。感染可加重GVHD，但是，真菌感染加重慢性GVHD的机制迄今尚未阐明。在前期研究中，我们报道了慢性GVHD的新模型，该模型GVHD的严重程度与供者调节性T细胞（Treg）负相关；预实验发现，对该慢性GVHD模型的小鼠注射酵母多糖（真菌细胞壁组分）会导致Treg减少，加剧慢性GVHD。本项目将在此基础上研究真菌感染加重慢性GVHD的抑制性免疫调节机制，采用免疫磁珠分选、流式细胞学、ELISA、免疫组化等技术在体内外分析免疫细胞（Treg、Breg、巨噬细胞等）的功能并过继回输，为临床上更好地控制真菌感染，运用过继疗法防治GVHD提供理论依据。

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）可治愈恶性血液病。移植物抗宿主病（GVHD）是移植后致死性的并发症。移植后侵袭性真菌感染可加重GVHD。本研究利用我们课题组报道的全新的慢性GVHD的新模型进行实验，该模型GVHD的严重程度与供者Treg负相关；同时，我们还对预处理方案进行改进，针对清髓的化疗作为清髓性照射的有效替代，应用了BF的清髓性化疗预处理方案，使得该模型更加贴近于目前实际工作的情况。对此二种慢性GVHD模型的小鼠注射酵母多糖会导致Treg减少，加剧慢性GVHD。实验中我们发现了放射创伤的强度与主要组织相容性复合体缺失相关的移植物抗宿主病密切相关；GVHD机制研究中发现B7H1在免疫调节中起重要作用。在真菌感染加重慢性GVHD中的下调机制提供了一种选择；为了过表达B7H1，我们发现水流动力学注射法方便、简单，通过质粒扩增提取、尾静脉水流动力学注射法、门静脉胶原酶灌流分离肝细胞技术、PCR、流式细胞及ELISA检测B7H1表达和功能并利用动物模型了解清髓预处理对水流动力学注射B7H1质粒的影响，为将来利用B7H1相关通路进行基因治疗降低机体过度免疫反应的转化医学模式奠定基础；同样也在机制研究方面，我们也发现了CCR7在GVHD免疫调节中的重要作用，在真菌感染加重慢性GVHD中的下调机制提供了另一种选择。在移植模型中，不同品系小鼠，其外周血TCRVβ亚家族的分布不同，我们利用酵母多糖加重GVHD所采用的小鼠模型,发现利用TCR Vβ亚家族分析法发现TCR Vβ6升高可作为识别小鼠亚临床MHC缺失诱导的移植物抗宿主病的指标。在酵母多糖加重GVHD的研究中，我们进行了供者来源的IL-17与剂量决定的酵母多糖加重慢性移植物抗宿主病效应的相关性研究。研究了酵母多糖葡聚糖对小鼠慢性GVHD的影响，了解了靶器官的Treg的情况。了解了细胞因子，共刺激因子在疾病发生发展中的作用。本项目通过三年研究工作，基本完成项目计划内容。为了达到研究目的，由于本项目与临床紧密相关，临床造血干细胞移植实践中的病例，也在课题基金的资助下得以发表。共发表文章7篇，参加学术交流1次，协助培养硕士研究生1名。此外，在本项目基金资助周期中，我们发现了老年小鼠衰老和炎症相关，免疫衰老表现为免疫活性细胞功能的下降，显示出细胞因子和慢性低度炎症状态。以此预实验结果为据，成功申请福建杰出青年科学基金。