中药复方青秦液保护高尿酸血症肾组织免疫病理损伤的生物学机制研究

高尿酸血症肾损伤的主要病理学改变为入球小动脉增厚，肾皮质血管收缩，肾小球内高压，肾小球肥大，最终导致肾小球硬化，肾组织纤维化，其发病机制与基因变异、血尿酸生成异常相关，其中尿酸代谢产物破坏血管内皮，激活免疫转导通路，上调炎性趋化因子，由此引起遗传、免疫、炎性因子相互影响，共同作用，构成了因果互动、恶性演变的病理学网络，致使病情渐进性加重。课题申请人长期从事内分泌代谢病的研究工作，对本病治疗有良好效果，可有效改善相关生化指标，前期相关课题研究证明，治疗药有良好的免疫抑制作用，对高尿酸血症介导的炎性因子过度释放而引发的免疫损伤有良好修复作用。为此，我们本次立项从免疫信号转导机制的研究入手，深入探讨高尿酸血症相关性肾病的易感染因素，以及高尿酸介导感染免疫的分子生物学基础，从而明确复方青秦液对高尿酸血症肾损伤的调节机制和作用靶点，为研究具有多生物学活性、多作用环节的纯天然中药提供依据。

摘要.高尿酸血症肾损伤发病机制与基因变异、血尿酸生成异常相关。其中尿酸代谢产物破坏血管内皮，激活免疫转导通路，上调炎性趋化因子，由此引起遗传、免疫、炎性因子相互影响，共同作用，构成因果互动，恶性演变的病理学网络，致使病情进行性加重。前期相关课题研究证明：治疗药有良好的免疫抑制作用，对高尿酸介导的炎性因子过度释放而引发的肾组织局部免疫损伤有良好的修复作用。为此，本次立项从免疫信号转导机制研究复方青秦液抑制高尿酸血症肾组织免疫病理损伤的作用靶点及生物学机制。实验结果显示：①中药复方青秦液可明显降低尿酸性肾病大鼠的尿蛋白浓度，降低血尿酸水平，降低血肌酐、尿素氮等指标，减少肾重指数（p<0.01）②形态学检测：模型组大部分肾小管中、重度萎缩变性，皮髓交界处肾小管内见大量尿酸盐结晶，肾间质纤维组织明显增生，伴有小灶状炎症细胞浸润，较对照组有显著性差异（p<0.01）。治疗组甲组、乙组大组的肾脏病变较模型组明显减轻（p<0.01），对模型大鼠肾小管尿酸盐结晶形成具有一定的改善作用（p<0.01），对肾小管上皮细胞萎缩变性具有明显改善作用（p<0.01）。电镜所见：肾间质炎性细胞浸润，间质纤维化，大量炎性细胞浸润，肾小管管腔破损、脱落，管壁增厚，局部增生严重，肾小管基底膜稍增厚，足突轻度融合。治疗组乙组大剂量组肾间质未见明显纤维化发生，肾小球基本正常，肾小管轻度扩张，足突稍融合。中剂量组肾间质少量纤维化，肾小管管壁轻度损伤，偶见断裂，少量空泡化。小剂量组肾间质纤维化较重，间质扩张、水肿，肾小管破损，基膜增厚。③RT-PCR、Western-blot、ELISA、免疫组化检查显示：模型组大鼠肾组织AngII、COX-2、MCP-1、ICAM1、NFκB、TLR-2、TLR-4等炎性因子mRNA转录及蛋白表达均较正常组显著上调（P<0.01），而AMPKa1、AMPKa2表达下调。治疗组不同程度下调上述相关炎性因子的高表达，并活化诱导AMPKα1、AMPKα2mRNA转录和蛋白水平表达。.研究表明：该药有效地下调了介导肾组织免疫炎性损伤的相关细胞因子TLR2、TLR4、Ang-Ⅱ、COX-2、NF-kB、MCP-1、ICAM-1基因转录及蛋白水平的高表达，而且可明显上调抗炎因子AMPK的表达。多环节多靶点发挥了对高尿酸血症肾组织病理损伤的干预作用，有效保护肾功能。