Notch/ephrinB2信号通路对脑梗死后远隔部位血管和神经增生调控机制的研究

我们研究已经证实，Eph/ephrin调节脑梗死后梗死灶周和室管膜下区神经增生。然而，脑梗死不仅导致缺血区损害，还引起非缺血区的远隔部位继发性损害，并阻碍神经功能恢复。本课题组进一步观察发现：脑梗死后远隔部位有血管和神经增生，而且远隔部位血管ephrinB2表达上调，提示ephrinB2可能与远隔部位血管增生有关。但ephrinB2是否调节远隔部位血管和神经增生并减轻远隔损害尚不明确。本项目拟采用易卒中型肾血管性高血压大鼠建立大脑皮层梗死模型，以Efnb2（ephrinB2基因）为靶点，探讨ephrinB2对远隔部位血管增生和神经再生的作用，进而以Notch受体通路对ephrinB2调节为核心，研究Notch/ephrinB2通路对远隔部位血管和神经增生的调控作用。既是我们前期研究的深入，也有助于进一步阐明脑梗死远隔血管增生和神经再生的调节机制，为脑梗死后远隔损害的防治提供新的理论依据。

脑梗死导致远隔损害并阻碍神经功能康复，然而远隔损害的机制不明确，本项目拟研究Notch/ephrinB2信号通路对脑梗死后远隔部位血管和神经新生调控机制，以期寻找脑梗死远隔损害新的防治策略。在易卒中型肾血管性高血压大鼠建立大脑皮层梗死模型上，采用DAPT抑制Notch1通路、Efnb2-shRNA下调EphrinB2表达以及EphB2/Fc调节Eph/EphrinB2通路，功能学评价后行常规病理学、免疫组化（荧光）、Western blot等检测。研究结果发现：脑梗死后7d同侧丘脑BrdU+/Laminin+、EphrinB2+/vWF+细胞以及血管密度均明显增加。Efnb2基因沉默组大鼠患者感觉功能下降，而EphB2-Fc干预明显改善感觉功能障碍。各组脑梗死灶体积无显著差异。基因沉默Efnb2同侧丘脑BrdU+/Laminin+细胞和血管密度减少，而且p-Akt、p-Erk1/2下降，同时同侧丘脑RAGE表达、Aβ沉积、GFAP+细胞均明显增加而MAP-2+细胞减少。反之，EphB2-Fc干预后同侧丘脑BrdU+/Laminin+细胞、血管密度、p-Akt和p-Erk1/2明显增加，RAGE表达、Aβ沉积、GFAP+细胞均减少而MAP-2+细胞增多。DAPT干预后同侧丘cleaved-Notch1和 EphrinB2水平较对照组降低。此外，基因沉默Efnb2后同侧丘脑BrdU+/MAP-2+细胞明显低于对照组，而EphB2-Fc干预后BrdU+/MAP-2+细胞显著增多。上述结果表明： EphrinB2 通路调节脑梗死远隔部位血管新生，其机制可能与上调Akt/Erk磷酸化有关。促进血管新生能够抑制远隔部位Aβ沉积、促进神经增生，进而改善远隔损害和神经功能。EphrinB2介导血管新生减轻远隔部位Aβ沉积可能与RAGE表达减少有关。研究结果为脑梗死后远隔损害的防治提供了新策略，具有潜在的临床意义。