miRNA-29a/c调控H3K4甲基化在前列腺癌病理机理中的作用

前列腺癌是威胁男性健康的常见肿瘤之一。前期研究我们首先发现，组蛋白H3K4特异性去甲基化酶JARID1B在前列腺癌中高表达；H3K4甲基化状态与前列腺癌患者预后相关；miRNA芯片筛查发现miR-29a/c在前列腺癌中低表达；通过荧光素酶报告基因实验发现miR-29a/c和JARID1B基因3-'UTR有结合位点。但在前列腺癌发病中miR-29a/c调控组蛋白去甲基化的分子机制仍不清楚。本项目拟通过上调前列腺癌细胞株中miR-29a/c表达后检测JARID1B基因表达量及细胞生物学行为改变、构建稳定高表达JARID1B的前列腺癌细胞株并行裸鼠皮下成瘤实验和前列腺癌标本组织芯片研究，分别从分子水平、组织水平、动物整体水平探讨miR-29a/c如何调控JARID1B，改变H3K4甲基化状态，进而调控前列腺癌细胞的发生、发展。本项目可为寻找前列腺癌新的分子诊断标记和治疗靶标提供科学依据。

目的.MiRNAs是一类非编码小RNA (Ribonucleic Acid,核糖核酸)分子,通常在转录后水平调控基因表达，可以介导蛋白质翻译抑制或mRNA降解。在本次研究中，miR-29a被证实在前列腺癌患者中明显低表达，KDM5B在前列腺癌细胞中高表达，且生物信息学分析显示miR-29a与KDM5B的3’-UTR有结合位点。探讨在前列腺癌中miR-29a与H3K4 特异性去甲基化酶——KDM5B之间的关系，验证miR-29a 通过调控KDM5B的表达来抑制前列腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。.方法..将miR-29a 模拟物（miR-29a mimic）片段和含野生型KDM5B基因3’-非翻译区的荧光素酶报告载体（KDM5B-wt）共转染至前列腺癌PC3和Lncap细胞后，进行荧光素酶活性检测。采用脂质体转染法将miR-29a mimics转染入人前列腺癌PC3和Lncap细胞中，MTT实验检测细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡；Real-Time PCR和Western印迹法检测KDM5B表达水平。.结果.1.双荧光素酶报告实验证明KDM5B为miR-29a直接调控的靶基因。.2. 基因表达实验证明良性的前列腺上皮细胞系WPMY-1中的表达明显低于四种前列腺癌细胞系（PC3/DU145/LNCaP/22Rv1）中KDM5B的表达。.3.转染miR-29a mimics后，KDM5B的表达被明显抑制 (P<0.01)，蛋白表达水平也明显低于NC组。与NC组相比，转染miR-29a mimics组细胞增殖能力显著降低(P<0.01)，细胞生长被阻滞在S／G2期，细胞凋亡率较NC组增加(P<0.01)。.结论.MiR-29a可以通过调控H3K4特异性去甲基化酶---KDM5B的表达而抑制前列腺癌PC3和Lncap细胞的增殖。MiR-29a有希望成为诊断和治疗前列腺癌新的分子标记和靶点。