GEBP11短肽抑制胃癌血管生成的分子机制

肿瘤血管生成在肿瘤的发生发展中具有极其重要的作用，深入阐明肿瘤血管生成的分子机制、明确发挥重要作用的关键分子，对于肿瘤血管抑制治疗有重要意义。我们通过噬菌体肽库筛选得到胃癌血管内皮细胞特异结合短肽GEBP11（已获专利）。研究发现，GEBP11短肽具有抑制胃癌血管生成的作用，这种作用可能是通过抑制内皮细胞的粘附、迁移实现的，但其具体机制尚不清楚。本课题拟通过血管生成相关实验，全面分析GEBP11与胃癌血管生成的相关性，明确它在胃癌血管生成中的功能；利用Western blot、RT-PCR、蛋白质双向电泳、基因芯片等方法，分析GEBP11作用后血管生成相关分子群表达的变化，为EGBP11抑制胃癌血管生成的可能机制提供线索；通过蛋白质免疫共沉淀、质谱分析等技术分离鉴定GEBP11的受体，并与GEBP11干预后表达异常的分子群相关联，探讨GEBP11及其受体参与胃癌血管生成调节的分子机制。

深入阐明肿瘤血管生成的分子机制、明确发挥重要作用的关键分子，对于肿瘤血管抑制治疗有重要意义。我们通过噬菌体肽库筛选得到胃癌血管特异结合短肽GEBP11，研究发现，GEBP11 短肽具有抑制胃癌血管生成的作用，但其具体机制尚不清楚。本项目计划从四方面展开研究：GEBP11 短肽与胃癌血管生成的相关性、GEBP11 作用后血管生成相关分子群表达变化、GEBP11 短肽结合受体的分离鉴定、GEBP11及其受体参与胃癌血管生成调节的分子机制。项目执行基本按照申请书研究目标和计划开展工作，总体进展顺利，除受体鉴定部分工作遇到困难并进行了技术方案改进外，基本完成研究任务，实现预期研究目标。本项目发表论文8篇（其中SCI两篇，IF计8.409），获得国家发明专利授权1项，获得省科学技术进步一等奖1项、省自然科学优秀论文二等奖1篇，获省科学技术鉴定登记成果1项，全国消化病大会录用投稿5篇（其中发言1篇），培养研究生5名。.本项目主要研究进展有：（1）证实GEBP11的受体表达于某些肿瘤组织血管和一些低分化胃癌细胞系，而在正常组织血管无表达。GEBP11结合受体亚细胞定位于胞膜及核周胞浆，与其受体结合后可被内化入胞内。GEBP11可在体外、体内抑制Matrigel中的内皮细胞形成管状结构，可抑制荷瘤裸鼠胃癌组织中的血管生成。（2）GEBP11作用于胃癌血管内皮细胞可引起多种基因表达变化，其中多种差异表达基因参与血管生成、肿瘤、粘附、运动等生物过程调控，部分差异基因在血管生成的各环节中发挥了重要作用。（3）初步探讨了GEBP11短肽抑制胃癌血管生成的分子机制：GEBP11短肽结合于内皮细胞，通过内化作用进入胞内或直接通过膜表面受体，对KDR、MMPs、Bcl-2/Bax、CAMs等分子发挥明显的负性调控作用，致使ECs增殖受抑、凋亡诱导增加，同时降低其基质降解、迁移、粘附能力，进而抑制血管生成。（4）通过免疫共沉淀-质谱分析法，获得了12个GEBP11短肽结合受体候选分子，其中，ZCCHC11经短肽处理后表达上调约3倍，是可能性较大的受体分子之一。但经多次尝试，重复性尚不理想，短肽分子量较小、亲和力较低可能是其重要的原因。项目组已改进技术方案，选用PEG修饰技术，成功制备多聚短肽，进而分离鉴定其结合受体的工作正在进行中。