共转录因子CITED1调控骨代谢的机理研究

CITED1（CBP/P300-Interacting Transactivator with Glutamic Acid/Aspartic Acid-rich C terminal domain-1）是参与调控基因表达的共转录因子，项目申请者于2008年首次报道了甲状旁腺素（PTH）促进CITED1表达，CITED1抑制成骨细胞分化。本课题在此基础上进一步探讨。研究内容：1,筛选与CITED1结合的转录因子以及受它调控的骨代谢基因、分析CITED1 对成骨和破骨的调节，探讨CITED1的作用机理；2，研究CITED1对间断小剂量（成骨为主）或连续大剂量（破骨为主）PTH的成骨和/或破骨功能的影响，探讨CITED1通过调节PTH的成骨和/或破骨功能调控骨代谢。意义：对CITED1的研究将（1）丰富对骨代谢生理和病理过程的理论认识，（2）可促进PTH抗骨质疏松基础和临床研究。

本课题完成：1. CITED1下游骨代谢相关基因的筛选，发现CITED1抑制OSX、BSP和ALP基因的表达以及PTH对上述基因表达的促进作用。2.首次发现PTH促进CITED1的细胞和转位，该转为现象与CITED1的63-84位氨基酸残基中存在8个丝氨酸残基磷酸化相关。磷酸化位点突变后，CITED1对骨代谢的作用受到逆转。其机理在进一步研究。相关文章在修回中。3.应用酵母双杂交技术筛选CITED1结合蛋白，经过4轮筛选，发现了Nucleobindin-2 isoform 2 precursor，等20余可能蛋白。包括数个线粒体代谢基因，核RNA修饰和破坏基因，结合我们已经发现的CITED1在细胞质的大量分布，CITED1可能除了通过CR2区影响CBP/P300， ER2的转录功能，还影响细胞的代谢。为将来的进一步研究提供了参考。4. 基因芯片技术筛选CITED1可能的下游基因。分析了其中40个基因，SAA3，CLC2，BSP等获得核实。5. PKC活化检测的荧光能量共转体系，分析了PTH及其模拟肽对PKC的激活作用，对于CITED1与信号选择性PTH模拟肽的研究提供了研究基础。 6.证明PLC在PTH促进去势雄性小鼠骨折愈合过程中不是必须的信号途径。7. CITED1敲除延迟了软骨骨化。.存在问题：由于引进的CITED1小鼠未能完成传代和扩增（尝试两次引进均失败），该部分实验未能进行。我们从新发现的PTH促进CITED1核转位的方向进行了深入研究，获得了较好的成果。由于CITED1除了在骨代谢中有比较重要的作用外，在肾的发育，甲状腺癌的发病中具有十分重要的作用，而其核移位是其发挥作用的重要一环，我们目前的研究和进一步的发展具有很好的意义。