老年性痴呆肾阳虚证与痰浊阻窍证同病异证及方证相应的生物学机制研究

The subject deeply investigates the hypothesis which is proposed in the previous research achievement. The hypothesis: biological connotation of different syndrome about AD has both common character and individuality. That is to say: objective specific and nonspecific relation exists between different syndromes and the pathological mechanism of AD, its specific relation reflects specific biological mechanisms of this syndromes, and the nonspecific contact reflects the common biological mechanisms of different syndromes; the correspondence which can be known exists between mechanism influenced by prescription of TCM and the specific-nonspecific biological mechanisms of the syndromes. This research studies two models of diseases combined syndromes, to take disease (SAMP8 mouse) and the constituent of syndromes (yang deficiency of kidney, turbid phlegm blocking clear orifice) as object of study, taking corresponding formula and unsuitable formula as the research method. It takes the six pathogenesis of AD, abnormal tau protein, amyloid precursor protein metabolic disorders, neuromal apoptosis, ubiquitin-proteasome pathway, immune inflammation response, cholinergic system as the breakthrough point, taking the related indexes of the pathological mechanism as the research content , the molecular biological techniques as the research method. The subject is to explore the biological connotation and the effect mechanism of the prescription's influence of the two typical syndromes, clarifying the scientific intention of the universality and specificity about the biological pathogenesis of AD in same disease with the different syndromes and the prescription-syndrome.

本课题围绕前期研究成果提出的假说进行深入探索。课题假说：AD不同证候的生物学内涵既有共性又有个性，即：不同的证候与AD的主要发病机制之间存在着客观的特异性和非特异性的联系，其特异性联系反映着该证候的个性生物学机制，其非特异性联系则反映着各证候之间的共性生物学机制；方剂干预的效应机制与证候的个性和共性生物学机制之间存在着可以认知的对应关系。本课题以AD的两个病证结合模型：病（SAMP8小鼠）加证候要素（肾阳虚、痰浊阻窍）为研究对象，以方证相应及方证不应为研究途径，以该病主要的六个发病机制：tau蛋白异常、淀粉样前体蛋白代谢失调、神经细胞凋亡、泛素-蛋白酶体通路、免疫炎症反应、胆碱能系统为切入点，以上述发病机制的相关系列指标为研究内容，以分子生物学技术为研究手段，探索AD两个典型证候的生物学内涵及方剂干预的效应机制，阐明AD"同病异证"与"方证相应"科学内涵的共性及特异性的生物学机制。

目的：本课题以AD的两个病证结合模型：病（SAMP8小鼠）加证（肾阳虚、痰浊阻窍)及方证相应为研究对象，以该病主要的六个发病机制：Tau蛋白异常、淀粉样前体蛋白代谢失调、神经细胞凋亡、泛素-蛋白酶体通路、免疫炎症反应、胆碱能系统为切入点，以上述发病机制的相关系列指标为途径，利用分子生物学技术手段,探索AD两个典型证候的生物学内涵及方剂干预的效应机制，阐明AD“同病异证”与“方证相应”科学内涵的共性及特异性的生物学机制。.方法：13只SAMR1小鼠分为ZC组，65只SAMP8小鼠随机分为MA组、SA组、SS组、TA组、TW组，每组各13只。按照分组建立老年性痴呆肾阳虚证、痰浊阻窍证病证结合小鼠模型，分别灌胃方证相应的肾气丸、温胆汤煎剂。从海马电镜切片、肝脏和肾脏光镜病理切片、血液生化指标、大脑皮层及海马生化指标等不同层面，观察同病异证的差异以及方证相应的内在机制。.结果：.1.MA组与ZC组比较：两组小鼠Tau蛋白、Aβ、Bax含量有显著性差异（P<0.05)。.2.SA组与ZC组比较：两组小鼠ACTH和CORT含量有显著性差异（P<0.05)。.3.TA组与ZC组比较：两组小鼠TG含量有显著性差异（P<0.05)。.4.SA组与TA组比较：SA组小鼠Tau蛋白、Aβ、Bax含量较TA组高，Bcl-2含量较TA组低，差异有统计学意义（P<0.05)。.5.SS组与SA组比较：ACTH和CORT、Tau蛋白、Aβ、Bax和Bcl-2、Ach和AchE含量有显著性差异（P<0.05)。.6.TW组与TA组比较：TW组小鼠TG、Tau蛋白、Aβ、Bax含量较TA组降低，Ach含量较TA组增多，且差异有统计学意义（P<0.05）。.结论.1.在同病异证的情况下，肾阳虚证与痰浊阻窍证都有病理损害，但是肾阳虚证病理损害比痰浊阻窍证更严重。说明同病异证时，病理损害可能有程度上的差异，并无特异性指标的差异。.2.方证相应时，对证方药可以通过抑制Tau蛋白过度磷酸化、抑制Aβ异常积聚，改善细胞凋亡，纠正胆碱能系统紊乱等多条途径治疗AD，说明对证方药的作用是多靶点、多途径的。不同证型对证方药的作用靶点不同，在本实验中未发现。.3.对证方药可以纠正西医病的相关病理指标，也可以纠正中医证的相关病理指标,说明方证相应时，治疗作用是广泛而全面的。