内皮素对二氧化硫促进变应性气道炎症的调节

目的 验证实验假说：二氧化硫暴露首先诱导气道上皮细胞活化、上调内皮素表达，对特异质个体，内皮素表达上调通过刺激支气管上皮细胞Th2细胞因子及嗜酸粒细胞趋化因子表达，加剧变应性气道炎症。内容 不同浓度梯度亚硫酸钠（不同暴露时点）对人（非特异质、特异质但无哮喘、变应性哮喘患者）原代支气管上皮细胞内皮素、Th2细胞因子（白介素-4、白介素-5、白介素-13）、嗜酸粒细胞趋化因子（eotaxin-1、eotaxin-2、 eotaxin-3）合成、分泌的影响及内皮素的调节作用（外源性内皮素刺激和/或内皮素A受体选择性拮抗剂－bq123阻断）；二氧化硫（0.5、5、50 ppm）暴露对不同致敏状态 BALB/c小鼠，气道上皮内皮素、Th2细胞因子、嗜酸粒细胞趋化因子分泌及变应原（卵白蛋白）激发后变应性气道炎症严重程度的影响，以及内皮素对以上过程的调节作用（染毒前bq123腹腔注射）。

前期研究发现二氧化硫预暴露促进卵白蛋白诱发的BALB/C小鼠变应性气道炎症及气道重塑，该过程中同时存在支气管肺泡灌洗液内皮素-1、白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3水平增高，二氧化硫预先暴露组BALF嗜酸粒细胞（Eos）比例、内皮素-1、白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3水平，均较单纯卵白蛋白暴露组显著增高，提示二氧化硫等大气污染组分可能通过上调气道白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3等的表达促进变应原暴露导致的气道炎症。.为观察不同特异质人群对环境中大气污染组分的反应，我们试图建立经气管镜毛刷刷检原代人支气管上皮细胞体外培养方法。尽管有时可成功分离培养原代人支气管上皮细胞，但培养成功率尤其是传代成功率极不稳定，因此，未能观察不同特异质人群原代支气管上皮细胞接触二氧化硫衍生物-亚硫酸钠后内皮素-1、白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3表达的变化。.故而采用人支气管上皮细胞系16HEB-14o为研究对象， 10 nM亚硫酸钠暴露4h，该组气道上皮细胞培养上清中内皮素-1水平显著增高；尘螨抗原300ng/mL Der p1孵育24h，气道上皮细胞培养上清中内皮素-1、白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3水平均显著增高；尤其是10 nM亚硫酸钠预先暴露4h再接触300ng/mL尘螨抗原Der p1 24h后，支气管上皮细胞胞浆内皮素-1、白三烯C4、IL-5、eotaxin-1、2、3的分泌均显著增高，并且高于尘螨组。首次发现经过二氧化硫衍生物预先激活的支气管上皮细胞，接受尘螨变应原刺激时，促进气道Eos募集的细胞因子、白三烯以及具有促进Eos浸润、促进气道炎症、支气管痉挛以及气道重塑的多功能细胞因子内皮素-1显著增高。.为进一步研究气道Eos浸润及白三烯高表达的临床意义，我们通过随机、对照临床研究，观察白三烯受体拮抗剂-钠对嗜酸粒细胞性支气管炎（EB）患者咳嗽症状、诱导痰Eos比例以及白三烯E4水平的影响，发现孟鲁司特可减轻咳嗽，抑制Eos气道炎症及白三烯表达，减少吸入性糖皮质激素剂量，提示白三烯在EB症状、Eos募集过程中发挥重要的致病作用。