圆根大戟和甘遂中保护多巴胺所致SH-SY5Y细胞损伤帕金森模型作用和机制研究

In our previous research, it was found that the chalcones in Euphorbia kansui and Euphorbia pekinensis Rupr. prevented the dopamine damage to nerve cells. On these foundations, we except to prove up how gansuione B (2) with the strongest biological acivity prevented the dopamine damage to SH-SY5Y nerve cells, and investigate the relations between the genes and the proteins prevented the dopamine damage such as activation and regulation. The PD rats induced by 6-OHDA will be used to explore how gansuione B (2) protect the molecule target of PD rats. Afterwards the chalcones were isolated and purified, the derivatives might be prepared by synthetic and semi-synthetic methods. The structure-activity study of chalcones will be based on molecule targets. And then the content determination method of the chalcones would be established by UPLC-TOF-MS in order to survey new medicinal plants resources. Meanwhile, the cultivation research of Euphorbia kansui and Euphorbia pekinensis Rupr. might provide basic technical supports for research and development of new medicinal resources.

鉴于前期大量活性筛选发现甘遂和圆根大戟中的查尔酮类成分具有显著地保护多巴胺所致的神经细胞损伤作用，并并已发现其中查尔酮类成分为其活性成分。在此基础之上，本课题拟对其活性最好的化合物gansuione B (2)保护多巴胺所致的SH-SY5Y细胞损伤的分子机制进行研究，探明其保护多巴胺损伤的基因、蛋白及其相互之间的激活和调控关系。并利用6-羟基多巴（6-OHDA）诱发的大鼠PD模型，探讨gansuione B (2)保护PD大鼠的分子作用靶点。通过对查尔酮类成分进一步的分离纯化，并利用合成和半合成手段制备系列衍生物，根据分子作用靶点对系列查尔酮类化合物进行构-效关系研究，以期为新型PD治疗药物的发现提供新药先导化合物和新的作用靶点。而进而利用UPLC-TOF-MS建立查尔酮类化合物含量测定方法，筛选新的药用资源植物，并通过对圆根大戟和甘遂栽培研究，为新药研究开发提供药用资源。

为了系统的研究甘遂（Euphobria kansui T. N. Liou ex T. P. Wang ）和圆根大戟 （Euphorbia rapulum）护多巴胺所致的神经细胞损伤作用的物质基础、作用机制、作用靶点及构效关系。本课题首先对甘遂和圆根大戟的乙醇提取物的化学成分进行了研究，从甘遂中分离鉴定了24个化合物，其中未见文献报道的新化合物1个，首次从大戟科中分离得到的化合物8个，首次从该种植物中分离得到化合物6个。从圆根大戟中分离鉴定了18个化合物，其中未见文献报道的新化合物4个。.鉴于前期大量活性筛选发现甘遂和圆根大戟中的查尔酮类成分具有显著地保护多巴胺所致的神经细胞损伤作用，并已发现其中查尔酮类成分为其活性成分。对其活性最好的查尔酮类化合物保护多巴胺所致的SH-SY5Y细胞损伤的分子机制进行研究，初步探明其通过抑制自由基，保护多巴胺对神经细胞的损伤。本课题设计合成了系列化合物，并对其进行了活性研究：发现了该类化合物通过调动细胞自噬发挥保护作用，进一步的系统生物学和生物信息学研究发现：该类成分可调动ULK1-mATG13-FIP200蛋白复合体，并且在自噬诱发过程中相互间联系紧密，该复合体的激活伴随着自噬的发生。实验结果表明，ULK1的Knowk down，导致了其直接作用的mATG13与FIP200水平有一定水平的降低，对ULK1复合体作用底物mTOR影响较大，进而影响自噬标记物LC3的表达。