膀胱肿瘤树突状细胞疫苗的制备及程序性死亡配体对其免疫效应的影响

膀胱癌是我国最常见的泌尿系恶性肿瘤，其主要特点是术后高复发率高，且有恶性程度增高的趋势，免疫逃避是导致复发的重要机制。树突状细胞（DC）是主要的抗原提呈细胞。程序性死亡配体是表达在DC等细胞上的抑制性共刺激分子，可通过影响DC提呈抗原激活T细胞的能力，参与膀胱肿瘤免疫逃避过程，且与BCG膀胱灌注等免疫治疗方法的失败有关。据此，我们拟首先通过制备小鼠骨髓来源的DC并负载膀胱肿瘤抗原，构建DC疫苗，再通过构建PD-L1腺病毒载体及siRNA，使DC疫苗PD-L1表达增高或降低，然后进行体外细胞实验以及肿瘤动物模型实验，研究PD-L1对DC功能的影响，揭示其参与膀胱肿瘤免疫逃避、影响疫苗疗效的机制，从而为获得一种新的膀胱肿瘤疫苗，找到预防膀胱肿瘤复发和进展的新途径奠定基础。

膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿系恶性肿瘤,免疫逃逸是导致膀胱肿瘤复发和进展的重要机制.树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前已知的专职且功能最为强大的抗原递呈细胞,以DC为基础的肿瘤疫苗已经被广泛应用于恶性肿瘤治疗,如何增强DC疫苗的抗原提呈能力成为提高DC抗肿瘤疫苗效能的关键.程序性死亡配体1(PD-L1)是表达在DC等细胞上的抑制性共刺激分子,可通过影响DC提呈抗原激活T细胞的能力,参与膀胱肿瘤免疫逃逸过程.本课题的研究内容主要包括:探讨膀胱肿瘤患者外周血DC的表型及免疫功能变化;研究阻断PD-L1通路对其免疫功能的影响;研究PD-L1分子对小鼠DC免疫效应的影响,探讨其免疫调节机制及生物学意义;制备PD-L1沉默的DC疫苗,评价其对T细胞的活化功能及其诱导T细胞的特异性杀伤膀胱肿瘤细胞的作用.课题完成情况:1.完成膀胱肿瘤患者外周血DC表型和免疫功能的检测;2.通过阻断PD-L1通路,研究了膀胱肿瘤患者外周血DC免疫功能的变化;3.制备了小鼠的DC并负载肿瘤抗原,成功构建DC疫苗;4.构建并鉴定PD-L1siRNA,观察其对DC的PD-L1沉默效果;5.已验证DC疫苗诱导的CTL对体外培养的膀胱肿瘤细胞的生物学效应,对比分析PD-L1对DC疫苗免疫效应的影响.课题的主要研究成果和理论:1.膀胱肿瘤患者外周血DC免疫功能检测研究表明,膀胱肿瘤患者外周血源性DC高表达PD-L1.低表达CD83及过多分泌IL-10是膀胱肿瘤发生免疫逃逸的原因之一.2.阻断PD-L1通路可使膀胱肿瘤患者外周血DC的免疫话性增强,提示可尝试通过PD-L1通路调节膀胱肿瘤患者的免疫功能,为防治膀胱肿瘤复发提供新途径.3.小鼠骨髓来源单核细胞经过细胞因子GM-CSF.IL-4联合诱导分化,可成功获取成熟DC细胞;PD-L1siRNA能完全沉默DC细胞上PD-L1的表达,PD-L1沉默的DC进一步成熟,抗原提呈能力增强.4.负载膀胱癌MB49抗原的DC可以诱导产生特异性的抗膀胱癌免疫效应,而沉默PD-L1增强了DC介导的抗肿瘤免疫反应.本课题已按计划完成项目计划内容,目前已发表SCI收录论文1篇(IF1.7),国内统计源论文4篇,培养博士2名,硕士1名.较为全面的完成了课题的各项任务和研究目标.