芪蛭降糖胶囊调控糖尿病肾病足细胞自噬的实验研究

Podocyte injury is an important factor leading to proteinuria and the continuous progress of diabetic nephropathy (DN).To maintain podocyte function and quantity is the key target in DN treatment. Podocyte cell autophagy defects exists under DN condition. Qizhi Jiangtang Capsule has the efficacy of supplementing qi and restoring yin and promoting blood circulation to remove meridian obstrution. Previous studies have shown that Qizhi Jiangtang capsule have certain repairing effect on podocyte injury, can reduce proteinuria in DN patients, and stabilize renal function. This study tries to investigate the effect of Qizhi Jiangtang Capsule on the podocyte autophagy in the db/db mice, and tries to explore the renal protection mechanism of Qizhi Jiangtang Capsule by observing cell autophagy, autophagy-related proteins expression and endoplasmic reticulum stress. The effect of Qizhi Jiangtang Capsule on the autophagy and apoptosis of podocytes induced by high glucose will be observed at different timepoint in vitro. Transmission electron microscopy (TEM), acridine orange staining, Western blot and other means are employed to observe the changes of the medicated serum of different doses on autophagosome, expressions of autophagy marker protein LC3，autophagy vascular gene Beclin-1 and phosphorylation of PI3K-AKT-mTOR pathway related protein AKT and mTOR in podocytes induced by hyperglycemia in vitro.The aim of this study is to explore the molecular mechanisms of podocyte protection of Qizhi Jiangtang Capsule, in order to provide new ideas and new targets for the treatment of DN.

足细胞损伤是导致糖尿病肾病(DN)蛋白尿及其进展的重要因素，维持足细胞功能和数量是其救治的关键靶点。DN状态下存在着足细胞自噬缺陷。前期工作表明，芪蛭降糖胶囊有修复足细胞损伤、减少蛋白尿、稳定肾功能等作用。该药对足细胞自噬是否有调控作用有待研究。本研究拟应用透射电镜、TUNEL、Western blot等手段检测db/db小鼠足细胞自噬标志物、相关蛋白水平表达的改变；利用体外细胞培养技术，分析该药含药血清对高糖诱导不同时间足细胞自噬和凋亡的影响；采用透射电镜和吖啶橙染色、Western blot等手段，观察该药不同剂量含药血清对体外高糖诱导足细胞自噬体形成、自噬标志蛋白LC3及自噬血管基因Beclin-1的表达、PI3K-AKT-mTOR通路相关蛋白AKT和mTOR磷酸化水平的改变。本研究拟从分子水平阐明该药对足细胞自噬的调控机制，为DN防治提供新思路和新靶点，具有重要理论意义和实用价值。

“芪蛭降糖胶囊调控糖尿病肾病足细胞自噬的实验研究”为国家自然科学基金面上项目，批准号81874440。截至2022年12月底，本课题预先设计的各种目标均已完成，包括实验研究、论文发表、人才培养以及学术交流等。本研究首次证明，中成药芪蛭降糖胶囊通过增加db/db小鼠肾脏足细胞和体外培养足细胞中自噬体数量、改善 db/db小鼠足细胞自噬缺陷，提高自噬水平，减少足细胞凋亡及足突融合。芪蛭降糖胶囊上调自噬标志蛋白LC3II/I和Beclin-1的表达，下调p-P13K、p-Akt和p-mTOR的表达，通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路增强足细胞自噬，改善糖尿病肾病足细胞损伤。本研究从分子水平阐明了芪蛭降糖胶囊对足细胞自噬的调控机制，为DN防治提供新思路和新靶点，为中药治疗DN提供分子生物学理论基础，为临床治疗提供实验依据，具有重要的理论意义和实用价值。.随着糖尿病发病率的升高和生命的延长，DN在慢性肾衰各种原发病中所占的比例越来越大，且其发展速度远快于其他原发疾病，因此，防止DN发生发展是肾病科临床面临的重大问题。目前治疗DN的主要方法是使用肾素-血管紧张素抑制剂（RAASi）——ACEI或ARB，或者使用免疫抑制剂如雷公藤制剂，以减少尿蛋白的排出。这些药物的确有效，但也有很大的局限性，此类药只能减少尿蛋白的排出，不能完全阻断尿蛋白排出，也不能完全阻止DN的进展。本研究的成功为DN的防治提供新的思路和靶点，具有广阔的临床应用前景。.课题组成员携本研究成果参加国内学术会议9人次，大会讲座3人次。本课题已发表论文7篇文章，其中SCI 1篇、双核杂志文章4篇、科核杂志文章2篇；待发表论文2篇，其中接到录用通知并缴纳版面费SCI文章1篇，已投稿SCI文章并接到录用通知1篇。培养青年医师4名、硕士研究生4名、博士研究生1名。生产该药的药企销售额翻番。在本课题研究的基础上，成功申报2022年度山东省自然科学基金创新发展联合基金，课题经费57万元。