TRPV4在大鼠背根神经节受损后异常放电的作用及痛觉过敏传导通路的研究

DRG的持续受压(CCD)可以产生异常疼痛，并伴有神经元的自发性放电增加。我们研究发现CCD导致的机械性异常疼痛与TRPV4的表达有关,且TRPV4-NO-cGMP-PKG通路参与CCD后DRG的痛敏作用。但TRPV4-NO的具体机制不清楚。NO已经被证实是参与伤害性疼痛的重要介质，受到转录因子NF-κB 的调控，且与钙内流有关。cAMP-PKA和cGMP-PKG可以引起CCD大鼠的热痛敏，但对正常大鼠则无效。只有当cAMP达到足够的浓度，PGE2导致的机械痛敏才转变为TRPV4依赖性。而且TRPV4是神经元兴奋性的重要的调节因素。因此，我们猜测①TRPV4-NO-cGMP-PKG通路可能是通过钙内流激活NF-κB，释放NOS，从而参与痛觉信号传递。②TRPV4参与CCD后DRG异常放电。我们拟采用膜片钳、激光共聚焦、流式细胞技术、siRNA及PCR扩增等技术研究上述痛觉过敏通路的机制。

本研究课题成功构建了大鼠背根神经节受损的动物模型(CCD模型)，鞘内注射TRPV4siRNA、NF-kB两种特异性阻断剂以及腹腔注射钙通道阻断剂后，采用RNAi、免疫荧光、Western blotting、RT-PCR、激光共聚焦、EMSA等技术发现TRPV4siRNA可降低CCD大鼠TRPV4的表达、减少细胞内Ca2+浓度、抑制NF-kB活性以及NO含量；NF-kB两种特异性阻断剂可降低NF-kB以及NO含量；钙通道阻断剂可降低细胞内Ca2+浓度、NF-kB活性以及NO含量。且这些改变均可部分逆转CCD后大鼠的热痛敏。利用在体神经纤维电生理技术记录大鼠背根神经节(DRG)持续受压后的异位放电情况，发现CCD后受损DRG可出现异位放电，阻断TRPV4可降低DRG异常放电频率和波幅，激活TRPV4可明显增加该异常放电。结论：①TRPV4-NO通路是通过钙内流激活NF-κB，释放NOS，从而参与痛觉信号传递。②TRPV4参与CCD后DRG异常放电。