自身免疫性肝炎新型自身抗原延胡索酸水合酶特异性T细胞免疫特征研究

自身免疫性肝炎（AIH）是一种病因未明的自身免疫性疾病。其发病机制是国际研究热点。我们前期研究已经借助SLA证实了抗原特异性T细胞免疫在AIH 的肝脏炎症活动中发挥重要作用，但SLA阳性率较低，不具普遍性。在前期工作中，我们通过蛋白质组血清学自身抗原鉴定系统，筛选和鉴定了新的AIH自身抗原"延胡索酸水合酶（fumarate hydratase ，FH）",并证明其对 AIH具有较高疾病特异度和灵敏度，可作为研究AIH的理想抗原。为深入研抗原特异性T细胞免疫在AIH中的发病机制，本研究拟以AIH 患者为研究对象，FH为靶抗原，人工合成重叠肽，结合ELISPOT、细胞分选、细胞系培养、ICS及流式细胞技术，分析FH抗原特异性T淋巴细胞反应特征及抗原特异性T淋巴细胞功能， 着重分析其与AIH不同疾病时期肝脏炎症活动度的关系，为开发新的AIH诊断指标、寻找阻断疾病发展措施提供思路和实验室依据。

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis , AIH）是一种病因未明的自身免疫性疾病。其发病机制是国际研究热点。在前期工作中，我们通过蛋白质组血清学自身抗原鉴定系统，筛选和鉴定了新的 AIH 自身抗原"延胡索酸水合酶（fumarate hydratase ，FH）",本研究以 AIH 患者为研究对象，建立AIH 随访数据标本库，定期对AIH 患者进行病情评估，并留取患者外周血单个核细胞、血清。对AIH患者进行了FH特异性T细胞数量检测，并结合细胞分选、细胞内细胞因子染色、流式细胞术等技术，对FH 特异性T细胞功能进行分析，联系临床数据，探讨了其在AIH 发病机制的作用。结果发现：在AIH 患者，遗传易感基因HLA-DR3较为罕见，而HLA-DR4较为常见，在HLA-I类分子中，HLAⅠCW01、CW03、CW07 因频率明显高于对照人群，可能为 AIH 的HLA Ⅰ类易感基因。与PBC、病毒性肝炎、健康对照比较，AIH组患者FH 特异性性T 细胞反应强度及反应频率均高于对照组，并达到统计学差异，并且随后的单肽确证实验中发现#37aa289-308为免疫优势抗原表位。通过细胞分选和细胞内细胞因子染色，发现FH 特异性T细胞即可被CD4+T 细胞识别又可被CD8+T细胞识别，但其中以HLA-1类分子限制为主。通过FH 抗原肽与AIH 外周血PBMC共培养，用Luminex技术检测上清中的细胞因子，结果发现，AIH PBMC受 FH 抗原肽刺激后释放大量的细胞因子和趋化因子。FH 的特异性T细胞反应与其自身抗体的产生有一定的相关性；并反应AIH 疾病的状态及活动期的炎症活动程度。结论：在AIH 患者外周血中存在FH 特异性T细胞反应，并具有一定的疾病特异性，这种FH 特异性T细胞反应与自身抗体产生之间存在交叉反应。FH特异性T细胞反应反应疾病的状态，并反应活动时期的炎症反应程度相关。证明FH 的确是一种AIH 的自身抗原，其特异性T细胞反应参与AIH发病机制。