核心岩藻糖修饰对E-钙粘蛋白及其下游蛋白的功能影响

本项目研究核心岩藻糖修饰对蛋白质功能的影响，以E-钙粘蛋白作为研究对象，探讨核心岩藻糖修饰对蛋白质功能的调节。通过靶向基因沉默、过表达方法，建立起α-1，6岩藻糖基转移酶（Fut8）高、低表达的2对具有不同转移能力的细胞模型。验证该细胞模型中的E-钙粘蛋白被Fut8催化。并进一步研究这种核心岩藻糖修饰对E-钙粘蛋白分子本身功能的影响，观察E-钙粘蛋白介导的聚集能力、与连环蛋白的亲和力，以及磷酸化水平的变化。同时观察核心岩藻糖修饰对下游分子β-连环蛋白的影响，作为一种分子外的影响，观察核心岩藻糖修饰影响β-连环蛋白在细胞核内聚集的现象。测定E-钙粘蛋白与β、α-连环蛋白亲和力的改变，测定β-连环蛋白与半乳糖凝集素-3亲和力的改变，测定它们磷酸化（酪、丝、苏）水平的改变，测定相关的蛋白激酶Src、Sac1的磷酸化，分析影响β-连环蛋白向细胞核转位的可能机理。

通过本项目的资助，我们建立起了α-1，6岩藻糖基转移酶（Fut8）高、低表达的2对具有不同转移能力的细胞模型。观察到了该细胞模型中E-钙粘蛋白被核心岩藻糖修饰。观察了E-钙粘蛋白介导的信号传导及其分子的磷酸化水平变化。同时观察到核心岩藻糖修饰对下游分子半乳糖凝集素-3的影响。通过实验我们发现了岩藻糖糖链参与肝癌细胞迁移的机制，过表达的岩藻糖糖链具有显著的抑制肝癌细胞迁移能力。由岩藻糖参与的Lewis x抗原的表达与结肠癌、胃癌的转移现象密切相关。我们还发现半乳糖凝集素-3可能受岩藻糖基修饰的调控，半乳糖凝集素-3的mRNA分子的3’非翻译区具有显著的结构异常，并且受到微小RNA let-7d的调控。发现E-钙粘蛋白经过核心岩藻糖修饰以后，蛋白激酶Src、AKT、GSK3β的磷酸化显著改变，浙西信号分子的变化可能是β-连环蛋白向细胞核转位的机理。