蜘蛛香抗犬细小病毒的作用机制研究

针对病毒性疾病对人畜造成危害严重、临床上又尚无特效治疗药物的国内外现实难题，结合中草药在治疗病毒性疾病所具有的独特优势，本研究拟以对多种人畜病毒性腹泻具有良好治疗作用的蜘蛛香各药效组分为研究对象，以犬细小病毒（CPV）为模式病毒，首先通过建立犬CPV病动物模型，观察蜘蛛香对该病的治疗效果；其次从病毒感染机体所产生的体液、细胞及黏膜免疫三个方面入手，采用流式细胞术、免疫组化、ELISA等技术揭示蜘蛛香免疫调节（间接抗病毒）的作用机制；最后从病毒繁殖周期所经历的穿入、复制和组装释放三个步骤入手，采用细胞病变法，通过观察蜘蛛香有效组分对CPV感染细胞的影响，阐明其直接抗病毒作用的具体环节及机制。以期明确蜘蛛香抗病毒的药效物质基础，为临床应用蜘蛛香治疗病毒性腹泻提供实验依据，同时为丰富对具有抗病毒或免疫调节功效中药的认识、扩展其应用提供支持。

病毒性疾病给动物及人类带来的严重危害是人所共知的，而病毒以其特殊的生物学特性和致病机理致使抗病毒药物研究进展缓慢，以致许多病毒性疾病至今仍缺少效果确切的治疗药品。祖国传统医学在数千年的临床实践中，运用中草药及其配方制剂防治病毒性疾病取得了丰富的经验。虽然许多中草药及其多种成分都有很好的抗病毒作用，但其作用机制、作用靶点都不明确，阻碍了其广泛应用和发展。本研究以对宠物业、养犬业危害严重的犬细小病毒为研究对象，遵循中兽医的“扶正驱邪”、“正气存内，邪不可干”的基本思想，从直接抗病毒和调节免疫两个方面重点研究中药蜘蛛香的抗病毒作用及其机制，力图探索一条揭示中药及其制剂治疗病毒性疾病机制的研究之路。本研究从疑似犬细小病毒病料中分离并鉴定了4株CPV，测定了其TCID50 并成功建立犬CPV发病动物模型；通过考察蜘蛛香对自然发病犬及人工感染犬CPV发病动物模型的治疗效果，表明蜘蛛香对自然发病犬有较好的保护作用，其治愈率可达83.3%；蜘蛛香可显著改善人工感染犬因病毒感染导致的肠上皮损伤。蜘蛛香具有显著的镇痛作用并可通过促进肠推进性蠕动加速排便，这一作用有利于缓解发病动物的疼痛症状并通过加快排便以促进病毒的排出。蜘蛛香可提高动物脾淋巴细胞的转化率，增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力进而提高机体的细胞免疫和非特异性免疫；蜘蛛香可提高血清中IFN-γ，IL-2的水平，降低TNF-α，IL-6的水平；蜘蛛香可显著提高犬外周血淋巴细胞CD3+/CD4+/CD8+细胞百分比，并显著提高CD3+/CD69+细胞百分比，提示其治疗作用与调节相关细胞因子水平，激发机体免疫力，增强NK细胞活性以及机体特异性免疫，形成免疫屏障，抑制病毒入侵肠黏膜，调节肠黏膜细胞的转运及渗透功能有关。在病毒感染细胞的各个环节中，蜘蛛香及其主要有效成分缬草素对CPV在细胞内的复制环节有显著的抑制作用。此外，急性毒性和亚急性毒性试验以及犬的耐受性试验表明蜘蛛香具有较好的安全性。综上，蜘蛛香可通过抑制CPV在细胞内的复制环节发挥直接抗病毒作用，通过增强机体的特异性和非特异性免疫发挥间接抗病毒作用，并可通过镇痛、改善肠蠕动等改善肠炎症状，且具有较好的安全性，本研究为临床应用蜘蛛香治疗病毒性腹泻提供了明确的实验依据，同时为丰富对具有抗病毒或免疫调节功效中药的认识、扩展其应用提供支持。