靶向导入miR-101沉默EZH2调控前列腺癌干细胞侵袭机制的研究

前列腺癌干细胞被认为是前列腺癌进展、复发的根源，EZH2基因的扩增促进了前列腺癌干细胞的分化增殖。我们的前期研究发现miR-101与EZH2密切相关，miR-101的缺失将导致EZH2的扩增。如何特异性导入miR-101来阻断前列腺癌干细胞中EZH2的表达，是miRNA靶向治疗前列腺癌的关键。前列腺干细胞抗原(PSCA)是前列腺癌干细胞的高度特异性生物标志，本研究拟以PSCA启动子修饰慢病毒，构建PSCA-(pre-miR-101)-Lentivirus重组载体，实现对前列腺癌干细胞特异性导入miR-101的目的。然后在体外培养系统中观察其对前列腺癌干细胞增殖、侵袭等生物学行为的调控，并在荷瘤鼠体内检测其对成瘤能力和侵袭特性的影响，从而探索miRNA靶向治疗前列腺癌的新途径。

前列腺癌干细胞被认为是前列腺癌进展、复发的根源，EZH2基因的扩增促进了前列腺癌干细胞的分化增殖。我们的前期研究发现miR-101与EZH2密切相关，miR-101的缺失将导致EZH2的扩增。本实验通过流式双标分选前列腺癌干细胞LNCaP，通过球囊形成、化疗耐药、软琼脂克隆等试验验证肿瘤干细胞的干性，证实了流式分选可以获得具有肿瘤干细胞特性的一群细胞（前列腺癌干细胞），western blot发现这群细胞高表达干性转录因子sox2、oct4、nanog、EZH2；通过体外siRNA干扰EZH2的表达，证实EZH2对癌干细胞的增殖，抗凋亡等发挥重要作用，通过荧光定量PCR方法初步鉴定出EZH2调控的下游基因，分析并提出EZH2调控前列腺癌干细胞可能作用途径；结合PIC TAR、 Target scan等软件预测可能调控EZH2的miRNA，采用实时荧光定量PCR验证筛选的miRNA，发现前列腺癌干细胞中miR-101缺失是导致高EZH2的主要原因；体外导入miR-101可以降低EZH2的表达，双荧光素酶试验发现miR-101可以直接结合到EZH2的3’---UTR，提示前列腺癌干细胞中，miR-101可以直接调控EZH2的表达。本研究通过阐明EZH2及其下游因子在前列腺癌干细胞中的作用机理，为靶向治疗前列腺癌提供新的思路和理论依据，有利于发现新型的抗前列腺癌药物，具有重要的理论，临床意义。达到了国际先进水平。