EphA2在胃癌细胞上皮-间质表型转化中的作用及其调控机制研究

上皮-间质表型转化(EMT)在肿瘤侵袭转移中的重要作用受到越来越多的关注，但是对其调控机制的认识仍然非常局限。我们的前期研究发现：通过沉默EphA2表达可抑制胃癌细胞EMT发生，降低其侵袭能力，下调下游信号分子Ras表达以及上调上皮细胞标志因子E-cadherin表达。本项目拟在以上研究结果的基础上，应用RNAi和过表达技术改变EphA2在胃癌细胞中的表达，观察不同处理组中细胞形态和侵袭能力以及检测与EMT相关的标志因子；建立胃癌细胞裸鼠皮下种植和腹腔内转移模型，探讨EphA2在胃癌侵袭和转移中的作用；升高或抑制Ras在上述EphA2表达不同的胃癌细胞中水平，检测MAPK蛋白以及与EMT相关的标志因子，观察不同处理组中细胞形态和侵袭能力，探讨Ras-MAPK信号通路在EphA2影响胃癌细胞EMT中的作用机制。本研究将阐明EphA2调控胃癌细胞EMT的分子机制并为治疗胃癌提供新的分子靶点。

背景：.侵袭转移是进展期胃癌患者死亡的主要原因，因此对该病侵袭转移机制的研究具有重要的意义。EMT是多种实体性肿瘤发生侵袭转移的早期关键事件，介导多种肿瘤的侵袭转移。EphA2受体在多种肿瘤呈高表达和高度异常活化，并与肿瘤的侵袭转移和治疗预后相关。Wnt/β-catenin信号通路被激活后将诱发肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。多种miRNA通过调控诱导EMT的信号通路或转录因子抑制E-cadherin的表达，从而促进EMT的发生。miR-125a-5p在胃癌中表达异常，并能够调控胃癌细胞的增殖、侵袭。.目的：.1.探讨EphA2在胃癌EMT中的作用；.2.探讨EphA2通过Wnt/β-catenin信号通路介导EMT的发生；.3.探讨miR-125a-5p通过调控EphA2影响胃癌细胞侵袭能力。.结果：.1.胃癌组织的EphA2及EMT关键因子表达高于正常胃粘膜组织，E-cadherin表达相反。胃癌组织中EphA2表达与病理学因素相关；EphA2与EMT发生呈正相关。.2.EphA2过表达促进胃癌细胞增殖，细胞周期分布发生变化，细胞的迁移和侵袭能力显著增强。EphA2被 siRNA抑制后反之。EphA2过表达，EMT上调，反之亦然。.3.Wnt/β-catenin通路特异性抑制剂XAV939能明显下调EphA2及p-GSK-3βSer9的表达，抑制细胞生长、细胞侵袭能力下降，Wnt/β-catenin通路的关键蛋白表达下调；EMT表达下调，EphA2过表达之后能够逆转XAV-939对于胃癌细胞的影响。激活剂LiCl处理后效果反之。 .4.miR-125a-5p能够上调EphA2、TAZ和TEAD2 mRNA和蛋白的表达，增强胃癌细胞增殖和侵袭能力，促进EMT。.科学意义：.1.胃癌组织中EphA2和EMT相关标志物的表达与胃癌的侵袭转移密切相关，可作为判断胃癌患者预后的指标。.2.EphA2能促进胃癌细胞SGC7901和AGS发生EMT，其机制与EphA2对于Wnt/β-catenin通路的调控相关。.3.miR-125a-5p在胃癌中高表达，促进胃癌增殖、侵袭和EMT。