角质形成细胞来源的外泌体在银屑病T细胞免疫异常中的作用及机制研究

Psoriasis is a T-cell-mediated disease characterized by hyper proliferative keratinocytes(KC). The abnormal activation of KC is closely related to the initiation and maintain of inflammatory microenvironment. However, the mechanism is not clearly understood. Exosomes are small membrane vesicles released by most cell types as a consequence of the fusion of multi vesicular endosomes with the plasma membrane. They play an important role in cell-cell communication, immune modulation and other physiology and pathological processes. Our previous studies demonstrated that KC can release exosomes and psoriatic KC-derived exosomes can induce effector T cells proliferation and cytokine production, which suggest that KC-derived exosomes are involved in inflammatory dysfunction in psoriasis. In this study, we will extract exosomes from KC, separate and identify the characteristics of its microRNA and proteins through cellular and molecular level, observe the function of KC-derived exosomes on modulating T cells, study the underlying mechanism. This will help us clarify the effect of KC-derived exosomes on regulating T cells and represent its significance in the pathogenesis of psoriasis, providing a theoretical basis for future treatment strategy.

银屑病是主要由T细胞介导，以角质形成细胞(KC)过度增生为特征的慢性炎症性皮肤病。KC的异常活化与银屑病炎症环境的形成和维持密切相关，但其具体作用和机制尚未完全阐明。外泌体（exosomes）是活细胞主动向胞外分泌的纳米级囊泡样小体，其所包含的蛋白和核酸参与了细胞间的信号传递，在免疫调节及炎症反应等许多生理和病理过程中有重要的功能。我们和其他学者的研究表明，银屑病状态下KC分泌的exosomes可以促进T细胞的增殖、分化及分泌细胞因子的能力，提示其参与了银屑病免疫紊乱的形成及维持。本课题以KC分泌的exosomes为研究对象，通过细胞水平及动物水平的实验，分离并鉴定其特征及特异性内含物表达，观察其对银屑病中T细胞增殖、分化及分泌细胞因子的作用，并探究其内在的分子机制，力图阐明KC分泌的外泌体对T细胞的调控作用及其在银屑病病理过程中的意义，为未来可能的治疗策略提供理论基础。

.银屑病是主要由T细胞介导，多种免疫细胞参与，以角质形成细胞(KC)过度增生为特征的慢性炎症性皮肤病。KC的异常活化与银屑病炎症环境的形成和维持密切相关，其与多种免疫细胞如T细胞和中性粒细胞之间的相互作用是银屑病免疫紊乱发生发展的重要事件，但其具体作用和机制尚未完全阐明。外泌体（exosomes）是活细胞主动向胞外分泌的纳米级囊泡样小体，其所包含的蛋白和核酸参与了细胞间的信号传递，在免疫调节及炎症反应等许多生理和病理过程中有重要的功能。我们从银屑病状态和正常对照状态下KC的培养上清中提取和鉴定eoxsomes；得到了粒径集中在30-150nm，表面表达CD63，CD9等外泌体表面标记的exosomes。通过细胞和分子水平的实验观察到银屑病KC exosomes可以被T细胞摄取，并促进CD4+T细胞增殖、细胞因子分泌及向Th17分化的作用；并发现其可被中性粒细胞摄取并活化中性粒细胞分泌炎症因子IL6,IL8，IL17和TNFa。 我们进一步对exosomes中的小RNA进行测序，并对其蛋白成分进行质谱分析，发现银屑病KC分泌的exosomes相较于正常对照exosomes，具有特征性的microRNA表达谱和蛋白表达谱。miR-381-3p在银屑病KC的外泌体中高表达并靶向CD4+T中泛素化酶UBR5促进Th17细胞的分化； 并通过活化NF-κB，ERK1/2和p38 MAPK通路促进中性粒细胞炎症因子如IL6，IL8，IL17和TNFa的表达。最后，我们在IMQ诱导的银屑病小鼠模型中发现exosomes参与了银屑病样炎症的发展，其中银屑病KC分泌的外泌体促进银屑病样炎症的发展。本课题以KC分泌的exosomes为研究对象，通过分子水平，细胞水平及动物水平的实验，阐明KC分泌的外泌体对T细胞及中性粒细胞的调控作用及其在银屑病病理过程中的意义，为未来可能的治疗策略提供理论基础。.