晶囊轮虫表型多态性和生殖策略对激素应答的影响

By using methods of experimental ecology and moleucular toxicology and using rotifer Asplanchna,which with phenotypic polymorphism,specific characteristics of life cycle ,and sensitive to environmental hormones, as test animal to study the effects of typical synthetic female hormone(such as progesterone and estrogen),male hormone(such as testosterone) and anti-endrogone(such as flutamide) on occuring and transforming of saccate, cruciform and campanulate, of amphibic female and on inducing of body wall outgrowths (BWOs) in rotifer Asplanchna under the stress of hormones.By using molecular probe technique to study the effect of hormones on harm for sperm ,fertilization behavior and fertilibility of rotifer.By using of molecular toxicological methods to study inducing and expressing law of heat shock protein 70 (Hsp70). Screening a novel test animal and establishing a technique method according to cycle life stragety and specific feature of rotifer responsing to typical hormones to evaluate rask of environmental hormones in the future.In order to exploite rotifer endocrinology and establish basic foundation for rotifer as standard test animal in the future.

以具有表型多态性和特殊生活史特征对环境激素敏感的晶囊轮虫（Asplanchna）为受试动物，利用实验生态学和分子毒理学方法,研究典型外源性合成雌激素（如，孕酮和雌二醇）、雄性激素（如,睾丸酮 ）和抗雄激素（如,氟他胺）胁迫对晶囊轮虫囊型( Saccate)、十字型( Cruciform) 和钟型(Campanulate)个体表型多态性发生及彼此转换规律的影响、激素对轮虫体壁特征突出物（BWOs）的诱导效应、对双性雌体诱导及转换规律的影响；利用分子探针技术，研究激素胁迫对轮虫精子损伤度、受精行为与授精力的影响；运用分子毒理学技术，研究激素对晶囊轮虫热休克蛋白（如 hsp 70）诱导和表达规律。通过揭示典型激素下,晶囊轮虫生活史策略和特异性特征的应答规律,为将来构建利用轮虫为模型动物评价环境激素风险的新受试动物和技术方法。为开拓轮虫内分泌学研究、推动轮虫作为未来标准模式动物奠定基础。

以对环境激素敏感的轮虫为受试动物，研究典型外源性合成雌激素（孕酮和雌二醇）、雄性激素（睾丸酮 ）和抗雄激素（氟他胺）胁迫，单独作用和联合作用下种群参数的差异，以及环境激素对卜氏晶囊轮虫生物学多态性的影响。并研究了氧化剂氯化铵、过氧化氢和γ-氨基丁酸对卜氏晶囊轮虫种群动态和抗氧化系统的影响。首次克隆了卜氏晶囊轮虫CAT基因的全长，利用Real time quantitative PCR检测了不同氧化剂下线粒体MnSOD，细胞质MnSOD与HSP70，CAT基因的mRNA表达量之间的关系。尝试从传统生态学与分子生态学两个方面研究外源性激素及氧化剂对卜氏晶囊轮虫抗氧化系统的影响。实验还开展了白藜芦醇和饮食限制对萼花臂尾轮虫寿命和生殖的影响研究工作，通过cDNA末端快速克隆 (RACE, rapid-amplification of cDNA ends) 技术克隆出萼花臂尾轮虫的 BcMnSOD, BcCuZnSOD， BcCAT，Bchsp40， Bchsp60和 Bchsp90基因全长，探究两者是否是通过同一个途径发挥抗衰老效应，进一步研究并探讨了抗氧化酶基因和hsps基因在轮虫衰老中的作用。实验运用双荧光探针标记方法，首次利用荧光染料Phalloidin-FITC和PI清晰地显示轮虫精子的全长，精子整体呈现头端稍膨大的线形结构，边缘具有褶皱膜。结合超微结构观察，可分为胞体部分及鞭毛部分，且精子无顶体。运用显微摄像连续观察了游离体外的成熟精子的运动方式，进行了静态与动态的跟踪拍摄。研究了雄性萼花臂尾轮虫在睾丸酮、孕酮、氟他胺三种类固醇激素和雄性拮抗剂暴露下的生理生殖情况的变化，分析各类参数，制作拟合曲线，探寻其行为与生殖能力的关系，以期利用雄性萼花臂尾轮虫作为水环境中对环境激素监测的雄性水生受试动物。实验利用实验生态学和分子毒理学方法，通过揭示典型激素下，轮虫生活史策略和特异性特征的应答规律，为环境激素风险评价提供新的思路，为构建利用轮虫为模型动物评价环境激素风险的新受试动物和技术方法，并推动轮虫作为未来标准模式动物奠定基础。