OPTN基因胚胎干细胞时空打靶嵌合体小鼠模型的建立

利用Cre/LoxP系统构建OPTN基因时空打靶载体，将两个方向相同的LoxP序列置于OPTN基因组序列C端功能域两侧的内含子中，并在组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌中检测LoxP位点的功能。将该打靶载体电击转染小鼠胚胎干细胞，经Southern杂交筛选到发生正确同源重组的中靶ES细胞克隆，通过囊胚显微注射将中靶ES细胞注射到受体小鼠囊胚腔，获得ES细胞种系嵌合体，对高嵌合度小鼠与C57BL/6J交配后的子代小鼠进行基因型鉴定，有望在国际上率先获得OPTN基因时空打靶嵌合体小鼠，并进行与原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma, POAG）相关的形态学观察和分子生物学检测，为研究OPTN基因的功能和探讨POAG发生的分子机制以及POAG的基因治疗奠定坚实的基础。