β-葡聚糖颗粒填装纤维状自组装肽作为疫苗载体的设计研究

β-葡聚糖是酵母表面的天然佐剂成份，通过与树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、天然杀伤细胞等细胞膜表面的Dectin-1受体结合起免疫调节作用。通过一系列化学方法可以去除酵母的细胞质、细胞核以及大部分细胞壁多糖，仅保留细胞壁主要成份β-葡聚糖，由此形成直径为2-4微米的β-葡聚糖颗粒（GPs）。由于GPs表面多空及内部中空的性质，可以将特异性抗原包裹于GPs内，通过GPs表面的β-葡聚糖将抗原直接递呈给抗原递呈细胞，激活特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。为增强抗原的稳定性和免疫原性，本课题拟将目的抗原与一种自组装肽Q11偶联，这种自组装肽在盐离子存在的条件下能够自组装形成稳定的β-折叠构象的纳米纤维，并稳定存在于β-葡聚糖颗粒（GPs）内，这种新型的抗原运输载体会刺激机体产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答，具有潜在的抗原靶向输送和免疫佐剂作用。

β-葡聚糖是酵母表面的天然佐剂成份，通过与树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、天然杀伤细胞等细胞膜表面的Dectin-1受体相互作用起到免疫调节作用。通过一系列化学方法可以去除酵母的细胞质、细胞核以及大部分细胞壁多糖，仅保留细胞壁主要成份β-葡聚糖，由此形成直径为2-4微米的β-葡聚糖颗粒（GPs）。由于GPs表面多孔及内部中空的性质，可以将特异性抗原包裹于GPs内，通过GPs表面的β-葡聚糖将抗原直接递呈给抗原递呈细胞，激活特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。本课题研究将目的抗原与自组装肽偶联，这种自组装肽在盐离子存在的条件下能够自组装形成稳定的β-折叠构象的纳米纤维，并稳定存在于β-葡聚糖颗粒（GPs）内，这种新型的抗原运输载体会刺激机体产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答，具有潜在的抗原靶向输送和免疫佐剂作用。我们制备并表征了β-葡聚糖颗粒（GPs），自组装肽、及偶联抗原的自组装肽；将双荧光标记的GPs和自组装多肽组装入GPs、通过吞噬实验，验证了巨噬细胞对该疫苗载体的特异性吞噬；进一步详细研究了装有荧光标记的自组装多肽的GPs在模拟消化液中的稳定性、通过口服给药的GPs包裹的自组装肽在动物活体内的传输和分布。我们发现荧光标记的GPs包裹的自组装肽在荷瘤鼠模型的肿瘤中有特异性聚集，并详细研究了GPs包裹的自组装肽在肿瘤组织中的分布，为其在肿瘤免疫的潜在应用提供了实验和理论依据。