新疆南疆动物乳头瘤感染流行病学调查及病原分子生物学特性分析

At present, there are few reports about animal papillomatosis in China. Southern Xinjiang is relatively closed and remote in many aspects by comparison to other regions of China. Due to relative peculiarity, territoriality and diversity of species resource, a few genotypes of papillomatosis have never clearly defined. .It is important for us to study deeply on epidemiological survey of animal papillomatosis in Southern Xinjiang. According to the theory of animal epidemiology, sick animals will be done by clinical diagnosis, pathological observation and PCR. Because animal papillomavirus can difficultly propagate in culture cells, animal papillomavirus tend to be detected with PCR. Based on the genome of animal papillomatosis and reference strain, specific primers and sequencing primers will been designed and the complete genome of animal papillomatosis will been amplified and sequenced..The result of these sequence analysis can reveal biological characteristic of animal papillomavirus. According to these results, we will analyze molecular epidemiology, trace of animal epidemic sources, molecular genetics, relationship between animal papillomavirus and human papillomavirus. It will help us to understand disease resource, distribution of disease, trend of disease, epidemic strength and establish the bank of epidemic disease of animal papillomatosis in Southern Xinjiang. It will enrich the data bank and resource bank of epidemic.disease of Xinjiang and China. .It is an important for local economy, society, health, disease prevention and control of Xinjiang to culture and stabilize teams of scientific research in Southern Xinjiang.

新疆南疆地区动物乳头瘤发病是怎么样的情况，没有较为详细的资料可查，另外，国内也没有较为全面的关于动物乳头瘤病毒研究资料，该病流行病学资料极为少，因此，及时开展动物乳头瘤病研究显得非常必要。据本项目组前期研究，目前，新疆南疆动物瘤存在多样性。. 依据流行病学原理，采用调查、临床诊断、病理学观察作初步诊断。由于细胞培养增殖乳头瘤病毒困难，目前倾向分子生物学技术,以PCR基因分型鉴定，根据确定基因型，设计特异性扩增引物和测序引物，获得准确全基因序列，解析病原分子生物学特征，进一步分析动物乳头状瘤病毒在新疆地区分子流行病学、疫源追溯、病毒分子遗传演化规律以及动物乳头瘤与人类乳头瘤之间的关系；全面掌握其来源、分布地域、流行趋势、流行强度、流行规律，建立新疆南疆地区动物乳头瘤病毒流行病学数据库，丰富新疆乃至全国动物肿瘤病资源库、数据库。最重要的是培养、稳定一批工作在新疆南疆地区科研队伍。

新疆动物乳头瘤发病情况、流行病学资料没有较为详细资料，动物乳头瘤病毒又存在多样性。课题组采用流行病学调查、临床诊断、现场采样，获得了南疆主要规模牛场、部分地区散养户的患畜乳头瘤样本。乳头状瘤组织进行切片、H.E染色、免疫组化检查，镜检阳性反应信号主要出现在细胞胞浆呈棕色，细胞核呈蓝紫色，表明此组织样品为BPV感染；PCR基因分型鉴定、确定南疆地区存在BPV-1、BPV-2、BPV-4、BPV-14、BPV-15、BAPV-3等基因型；获得四株病毒基因组全长序列，分别为：SY-12为BPV-1基因型，AKS-01株为BPV-2基因型，AKS-03株为BPV-14基因型，属于Delta属牛乳头瘤病毒。AKS-02株为BPV-15基因型，属于Xi属牛乳头瘤病毒，为疫源追溯、遗传演化规律研究提供了理论依据；获得一株国际上以本课题组鉴定的BPV基因型作为BPV-15型，以此BPV-15基因型撰写一篇该病毒全基因组测序及基因组结构特征分析的SCI论文。通过分子流行病学分析，确定了南疆地区BPV1、BPV2基因型为优势基因型，同时，也存在BPV1、BPV2混合感染情况；以L1基因的特异性引物扩增目的片段，成功构建BPV-1 L1基因的原核表达系统pET32a-L1，经优化获得目的融合蛋白，为更深入研究L1蛋白抗原作为疫苗的可能性打下基础；以E6基因特异性引物，克隆BPV-1 E6基因，成功构建E6真核表达系统pEGFP-N1-E6，并转染至BHK-21细胞内，BPV-1 E6基因真核表达系统构建，为功能基因的致癌特性研究奠定基础。.通过本项目基本掌握了新疆南疆地区牛乳头瘤的感染情况、分布地域、病毒基因型、优势基因型；采用系统发育树分析动物乳头瘤病毒与人乳头瘤病毒亲缘关系，两者是不同属的乳头瘤病毒。建立新疆南疆地区动物乳头瘤病毒流行病学数据库，丰富新疆乃至全国动物肿瘤病资源库、数据库。