杂交型盐酸克伦特罗仿生免疫分析与分子识别机理

Clenbuterol hydrochloride is an illegal drug used in animal and poultry culture, which is harmful to human health.For the safety of livestock and poultry products, it is meaningful to establish the detection method with high efficiency,sensitive,rapid,easy and high specificity for CLB residues.At present,biomimetic immunosorbent assay based on molecular imprinted polymer is the hotspot and front in detection area.Molecular imprinted biomimetic antibody is an ideal molecular recognition element to replace antibdy due to its properties of molecular recognition,stable performance,easy preparation,easy preservation,and regeneration. To improve specificity of the biomimetic immunosorbent assay is the urgent problem in applicaton of food safety testing,since the specifity of biomimetic material is bad at the side of antibody.So a hybid imprinting polymer as biomimetic antibody will be prapared based on CLB molecular characters in this study to improve the specificity of biomimetic antibody,and a biomimetic immunosorbent assay will be development to detect CLB resides. In addition, to explore molecular recognition mechanism of biomimetic antibody, density functional theory,molecular dynamics simulation,and monte carlo method will be employed to simulate molecules and inter-molecular forces,which will provide theory foundation for molecular imprinting biomimetic immunoassay.

盐酸克伦特罗（CLB）是非法残留在畜禽产品中危害人类健康的药物，为确保畜禽产品安全，建立其高效、灵敏、快速、简便、特异性强的检测方法有重要的现实意义。分子印迹仿生免疫分析是目前检测领域研究的热点和前沿，分子印迹仿生抗体具有分子识别、性能稳定、易制备、易保存、可再生等优点，是代替生物抗体的理想分子识别元件，然而与生物抗体相比，分子印迹仿生抗体存在交叉率高、特异性差等缺陷。所以，研究如何提高仿生抗体的特异性成为该分析方法在食品安全检测应用中亟待解决的问题。本项目拟根据CLB分子结构特点设计合成杂交型分子印迹仿生抗体，通过降低仿生抗体中非特异性结合位点数量的方法，来提高仿生免疫分析方法的特异性；另外，本项目拟采用密度泛函、分子动力学模拟、蒙特卡罗等计算方法对CLB在仿生抗体孔穴中的分布和相互作用进行理论计算，结合实验结果，在分子层面探索仿生抗体的分子识别机理，为仿生免疫分析提供一定的理论支持。

分子印迹仿生抗体是目前代替生物抗体的理想分子识别元件之一，然而与生物抗体相比，分子印迹仿生抗体依然存在交叉率高、特异性差、灵敏度低等不足，限制了仿生免疫分析方法的发展和应用。. 本项目首先根据“瘦肉精”类药物盐酸克伦特罗分子结构特点设计与甲基丙烯酰氯合成目标复合物，通过交联剂用量、致孔剂选择、扫描电镜、红外光谱、氮吸附、特异性、吸附容量、吸附动力学等研究，提高了盐酸克伦特罗分子印迹仿生抗体的特异性和选择性；通过对仿生免疫反应体系的有机溶剂含量、pH等影响因素的研究，建立了仿生免疫分析方法（BELISA），并对该方法的准确性、重现性等参数进行评价。进而对仿生抗体与目标物之间的分子识别机理进行了探讨，为仿生免疫分析的发展提供了重要理论依据。该杂交型盐酸克伦特罗分子印迹仿生抗体制备时以共价键方式与功能单体结合，应用时以非共价键方式吸附目标物，为提高仿生抗体的特异性和灵敏度提供了一条切实途径。项目同时利用该仿生抗体建立了盐酸克伦特罗残留新型分析检测方法，为食品安全检测提供了重要的技术基础。