脂质体介导化疗药物靶向治疗EGFR表达阳性乳腺癌的研究

Breast cancer is a common malignancy with the higher mortality rate. There are poor efficacy and toxicity for breast cancer treatment due to the lower selectivity of traditional chemotherapy drugs and multidrug resistance phenomenon. We choose PEG liposome containing amphiphilic block copolymer mPEG2000-VE (TPGS2K) as carrier of chemotherapy drug Docetaxel (DTX). To improve the effect of DTX liposome to breast cancer with EGFR overexpression, we are aimed to synthesize GE11-PEG2000-VE and prepare active targeting DTX liposome with GE11 as ligand using after inserting technology. This drug delivery system with good stability can successfully avoid the phagocytosis of reticular endothelial system, actively target to tumor cells and reverse multi-drug resistance of tumor cells to get the best therapeutic efficacy of DTX to breast cancer. This study will provide the experimental basis and theoretical guidance for the design of the small molecule chemotherapy targeted drug delivery system to solve the current difficulties faced by breast cancer chemotherapy, and provides a new idea for the chemical treatment of breast cancer.

乳腺癌是一种严重威胁女性健康的恶性肿瘤，在我国的发病率逐年上升，患者存活率低，生存质量差。临床常用的一线化疗药物存在选择性低，易产生多药耐药等问题，导致治疗效果差，全身毒副作用显著，治疗效果不佳。本课题拟选取含两亲性嵌段共聚物mPEG2000-VE（TPGS2K）的脂质体为载体，为了提高多西他赛脂质体对EGFR高表达乳腺肿瘤细胞的治疗效果，将首次构建一种新型的纳米材料GE11-PEG2000-VE，然后利用“后插入”技术制备成含GE11-PEG2000-VE的多西他赛主动靶向脂质体。该脂质体能够躲避网状内皮系统的吞噬作用，稳定性好，具有主动靶向于肿瘤细胞的作用，还可逆转肿瘤细胞多药耐药，从而高效发挥多西他赛的乳腺癌治疗效果。本课题旨在阐明该纳米载体主动靶向肿瘤的机制和逆转多药耐药的机制，为提高药物对乳腺癌的疗效，降低毒副作用提供新方法和新思路。

透明质酸（HA）是一种生物相容性好、无毒、无免疫原性的天然高分子材料，自身富含羧基而荷负电。研究表明，HA可以与三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）表面过表达的CD44受体特异性结合。聚乙烯亚胺（PEI）是一种常用作基因载体的亲水性阳离子聚合物材料，具有高密度游离氨基，荷正电，血液循环中容易导致溶血、蛋白吸附等现象，产生较大的毒性。基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在肿瘤组织高表达，在肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用，特异性的多肽序列可以被MMP-2降解，我们将HA和PEI通过这种多肽连接起来，纳米粒表现为负电，当纳米粒到达肿瘤组织的时候多肽被MMP-2降解，纳米粒粒径变小，更容易穿透肿瘤组织，同时PEI的正电暴露出来，更容易被肿瘤细胞摄取。该研究中我们合成了一种基质金属蛋白酶敏感的高分子材料HA-PLG2-PEI,通过优化HA和PEI的比例，可以使其在水溶液中自组装形成粒径200nm左右，大小均一的胶束，其中在HA/PEI为5：1时，HA-PEI胶束粒径为115.0±4.153nm，PDI为0.043±0.019，电位为-16.7±0.987mV；HA-PLG2-PEI胶束粒径为135.2±1.250nm，PDI为0.141±0.014，电位为-21.7±1.05mV，当N/P大于20时对siRNA具有良好的包载能力。流式细胞实验检测MDA-MB-231细胞和Hela细胞的PD-L1和CD44均为高表达，选用这两种细胞进行摄取实验、MTT实验和干扰实验，结果表明，HA/PEI大大降低了PEI的毒性，并且不影响其将siRNA转染进入细胞的能力，并且可以帮助PD-L1 siRNA实验沉默PD-L1基因表达和蛋白表达。该研究为肿瘤免疫治疗与基因治疗提供了一种新的策略。该技术可以实现 “以基因为导向的个体化治疗”，具有很好的应用价值，因此具有较强的创新性和显著的特色。