从mTOR细胞自噬信号通路探讨调肝治法抗应激损伤及肝主疏泄的功能机制

To dredge and regulate is one of major function of liver, it refers that the liver ensure the free movement of qi and prevents qi stagnation. It is basement of normal life.it can result body disorder if the free coursing of liver losing. Cell is the basic functional unit of body,so that regulating activity of life of free coursing should be expressing on the level of cell. Autophagy is a phenomena of cell relieving abnormal protein and cytoplasm by cytolysosome, and it is very important to maintain stable interior environment of cell and metabolizing equilibrium of substance and energy in the cell. If autophagy is abnormal, the function of cell will be disordered or death. the mechanism of autophagy is like free coursing of liver. so we suggest the hypothesis: "autophagy is the expression of free coursing of liver on the level of cell". this study will surrounding the hypothesis, on the base of our last study, using the way of molecular biology and behavior medicine. To study the mechanism of the method of soothe the liver effect autophagy of hippcampal neurocyte of chronic psychological stress rat from the mTOR signal way. the study will develop the theory of zangxiang and cause of disease. and afford the evidence for finding new drug to antistress.

主疏泄是肝的主要生理功能之一，通过疏泄全身气机以维持人体正常的生命活动，肝的疏泄太过或不及皆可导致人体生理活动异常。细胞是人体最基本的功能单位，肝主疏泄对生命活动的调节必然在细胞层面体现出来。自噬是细胞通过溶酶体降解内部异常蛋白质、清除受损细胞器等以维持自身内环境稳定及物质与能量代谢平衡的重要机制，细胞自噬能力减退或太过都会导致细胞内环境失衡、功能失常甚至死亡,这与肝的疏泄功能非常相似。据此，我们提出“细胞自噬是‘肝主疏泄’功能在细胞层面的具体表现 ”的假说。本课题在前期研究的基础上，围绕这一工作假说，采用行为学与分子生物学等研究方法，从mTOR这一细胞自噬的主要调节通路观测慢性心理应激对大鼠海马神经细胞自噬功能的影响及调肝治法对其调控作用的相关机制，为发展和丰富中医肝藏象及情志病因理论提供实验依据，同时也为中医药抗应激损伤研究提供新的思路。

自噬是细胞维持胞内环境稳定、正常物质代谢的一项基本功能，自噬功能抑制或过度激活均可导致细胞内物质代谢异常而影响细胞的正常功能甚至死亡。中医学认为，气是构成人体的最基本物质，气在体内运行通畅无滞是维持人体正常生命活动的基础，气的正常运行有赖于肝的疏泄功能，肝失疏泄则致气机失调而百病由生。细胞自噬对体内物质代谢的影响与中医藏象理论中“肝主疏泄气机”功能有很大的相似之处。据此，我们提出工作假说：“细胞自噬是肝主疏泄功能在细胞层面的具体体现”。围绕这一工作假说，通过设立动物在体与离体细胞培养两部分实验，以慢性应激模型大鼠及谷氨酸处理离体培养大鼠海马神经细胞为研究对象，从行为学、形态学、分子生物学等多层次、多角度对比调肝、健脾及补肾三种治法方药对两种模型状态下海马神经细胞自噬功能的影响及调控机制。结果发现慢性应激状态下海马神经细胞的自噬功能被过度激活而致损伤甚至死亡，行为学上表现为体重增长减缓、活动减少、空间学习记忆能力降低等抑郁样改变；形态学上则表现为神经元密度变小，数量减少，锥体细胞间隙增大，神经元结构模糊，形态不规则，排列疏松紊乱，胞浆尼氏小体浅染或消失等。调肝治法能够通过升高大鼠脑脊液中BDNF、5-HT含量，降低血清中ACTH、CORT含量，激活海马PI3K/Akt/mTORC1信号通路级联反应来抑制细胞自噬的激活，减缓慢性应激对海马神经元损伤，改善模型大鼠的行为学与形态学指标。研究结果初步验证了工作假说：细胞自噬是“肝主疏泄”功能在细胞层面的具体体现。调肝方药抗应激损伤的作用机制可能与其介导mTORC1信号通路对自噬功能进行调控相关。