2型神经纤维瘤病中CD33+CD11b+细胞抑制功能及机制研究

Neurofibromatosis type 2 (NF2) is a systemic multiple benign tumor syndrome with malignant biological characteristics, surgery can not cure it and the prognosis is poor. Our previous study found that NF2 patients are in an immunosuppresive state, circulating CD33+ CD11b+ cells in NF2 patients are abnormal increased, NF2 patients’ primary tumor cells can induce normal PBMC transform into CD33+ CD11b+ cells, thus we hypothesized that CD33+CD11b+ cells are myloid-derived suppressor cells and mediate immunosuppression in NF2. In this study, first we will sort the CD33+ CD11b+ cells from NF2 patients’ peripheral blood or auditory nerve sheath tumor tissues using flow cytometry and analyse its function on CD8 + T cell proliferation and PBMC differentiation; Second, we will analyse the cytokine profile in NF2 patients’ plasma and compare it with healthy donners, and we will also use RT -PCR,probes and colorimetry to detect the cytokines and co-stimulatory molecules expression, ROS and arginase activity to explore the possible mechanisms of CD33+ CD11b+ cells' function; finally ,we will test the change in tumor progression and microenvirment after using specific reagent reverse the function of CD33+ CD11b+ cells in cells and transgenic mouse model. This study will offer novel therapeutic targets and lay a fundation for the individual therapy, drug and new vaccine candidates development and application.

2型神经纤维瘤病（NF2）为良性多发肿瘤综合征，具有恶性生物学特征，手术不能根治且预后差。我们前期研究发现NF2患者处于免疫抑制状态，循环CD33+CD11b+细胞异常增多，原代肿瘤细胞可诱导正常PBMC向CD33+CD11b+细胞分化，因而提出假设CD33+CD11b+细胞为NF2中的MDSC并介导NF2的免疫抑制。本课题拟首先通过流式分选出NF2患者外周血及听神经鞘瘤组织中CD33+CD11b+细胞，分析其对同系CD8+T细胞增殖及PBMC分化影响；其次采用ELISA分析血浆中细胞因子表达，RT-PCR、探针法及比色法检测细胞因子及共刺激分子表达、ROS含量及精氨酸酶活性以分析该群细胞发挥功能的可能机制；最后通过在细胞及转基因小鼠动物模型中逆转该群细胞抑制功能后探讨对肿瘤细胞增殖及微环境的影响。完成本课题将对揭示NF2肿瘤发生发展机制、确立新的治疗靶点、药物及疫苗的开发、应用奠定基础。

2型神经纤维瘤病（NF2）为良性多发肿瘤综合征，具有恶性生物学特征，手术不能根治且预后差。目前认为免疫治疗作用范围广、靶向性强且副作用小，适于多发肿瘤的治疗，或是解决NF2的根本途径。本项目前期研究发现NF2患者处于免疫抑制状态，循环CD33+CD11b+细胞增多，原代肿瘤细胞可诱导PBMC向CD33+CD11b+细胞分化。本项目基于前期研究基础，通过结合组织标本及细胞学实验，综合运用流式、ELISA及RT-PCR等检测方法，以期进一步明确NF2患者免疫状态，鉴定HLA-DR-CD33+CD11b+细胞为NF2中MDSC，并探讨其介导免疫抑制的可能机制。结果表明：1.相对于健康受试者，NF2患者血清中IL-10，TGF-β含量升高，培养上清中IFN-γ含量降低，淋巴细胞增殖减慢，外周血中Treg细胞比例增高，且在肿瘤组织中有浸润，从而进一步明确NF2患者为免疫抑制状态。2. NF2患者外周血HLA-DR-CD33+CD11b+细胞相对于健康受试者比例增高，且在肿瘤组织中有浸润，手术可降低循环HLA-DR-CD33+CD11b+细胞比例；NF2肿瘤原代细胞可通过高表达IL-1β, TNFα及GM-CSF诱导PBMC向HLA-DR-CD33+CD11b+表型分化；相对于CD33-细胞，HLA-DR-CD33+CD11b+细胞可显著抑制CD8+T细胞增殖及IFN-γ的分泌，并促进CD8+T细胞凋亡，诱导PBMC向Treg细胞分化；证明HLA-DR-CD33+CD11b+细胞为NF2中MDSC。3. HLA-DR-CD33+CD11b+细胞TGF-β、iNOS、NOX2表达上调，同CD8+T细胞共培养上清中TGF-β表达升高，特异抗体阻断后，CD8+T细胞增殖能力提高，提示HLA-DR-CD33+CD11b+细胞发挥免疫抑制的可能机制为通过促进TGF-β的分泌进而抑制CD8+T细胞的增殖。4.细胞水平逆转HLA-DR-CD33+CD11b+细胞免疫抑制功能后，CD8+T细胞增殖增高，提示可通过逆转HLA-DR-CD33+CD11b+细胞功能调节NF2肿瘤免疫微环境。MDSC为介导免疫抑制的重要细胞群，研究其介导免疫抑制的具体机制可为肿瘤免疫治疗提供有效的新靶点。本课题的研究结果为NF2肿瘤的免疫治疗研究打下了良好的实验基础，从而为理解NF2疾病的发生发展机理研究提供新思路。