流动式微量热法研究蛋白质在层析柱上的变构机理

利用微量热技术测定蛋白质在固－液界面上的吸附焓，是从能量角度研究蛋白质在固相介质表面吸附以及该过程中是否发生变构最为直接的手段。本项目研究拟采用流动式微量热法，在完全模拟实际层析过程的条件下，对变性蛋白质在固定化金属螯合层析（IMAC）柱上的摩尔吸附焓进行准确测定，以此对蛋白质在层析柱上发生折叠的能量变化规律和变构机理进行研究。将以溶菌酶和带有组氨酸标记的基因工程人粒细胞集落刺激因子G-CSF和人复合干扰素C-IFN为模型蛋白，通过测定不同变性剂浓度、温度、蛋白质与IMAC介质亲和作用力等一系列条件下，变性蛋白质在IMAC层析柱上的摩尔吸附焓，结合吸附自由能和吸附熵变数据的测定，深入研究蛋白质在IMAC层析柱上折叠复性的能量变化规律和变构机理。此研究成果将有助于从热力学角度认识蛋白质在层析柱上折叠复性机理这一重要前沿科学问题，并且为复性过程的条件优化和控制提供理论指导。