维生素D缺乏对树突状细胞TLR2激活结核获得性免疫的影响及机制

既往研究证实维生素D缺乏抑制天然免疫，导致结核易感性。本课题组发现维生素D缺乏与T淋巴细胞亚群失衡密切相关，机制不清。结合药理剂量1,25(OH)2D3下调RelB表达、抑制DCs成熟、阻碍Th1激活的认识，推测维生素D缺乏影响RelB表达而调控DCs的分化、成熟，导致下游T淋巴细胞亚群失衡。本课题选用维生素D缺乏、VDR基因敲除、正常小鼠DCs，结核杆菌脂蛋白刺激TLR2，比较研究DCs表面共刺激分子表达、自体混合淋巴细胞反应，Western blot和Real time PCR检测RelB表达，ChIP检测含维生素D受体反应元件的RelB基因启动子区组蛋白乙酰化水平；进一步体外干预HDAC3基因沉默和过表达，比较DCs表型、功能变化，低通量微阵列芯片检测免疫相关靶基因表达谱的变化。旨在研究环境因素导致维生素D缺乏对结核获得性免疫的影响和机制，为完善群体结核病防治奠定基础。

中国是结核高疫情国家，是世界上22个结核病高负担国家之一。第四次全国结核病流行病学抽样调查显示重庆地区为549/10万人，是结核病的高发地区，每年新发现4万结核病患者，是京津沪的10余倍，其原因目前尚不清楚。重庆是著名的山城，其年日照量全国最低，紫外线照射严重不足。.为研究VD缺乏在结核感染发病中的作用，课题组成功建立了VD缺乏小鼠模型，用卡介菌刺激观察体内的免疫变化与正常小鼠刺激后的差别。发现正常组、VD+组及VD-组脾淋巴细胞中CD4+细胞亚群百分率分别为28.64±0.59、24.86±0.49、30.1±0.8， CD8+为10.9±0.72、9.42±0.55、14.14±0.83， CD4+/CD8+的比值分别为2.64±0.19、2.66±0.23、2.13±0.09，VD-组CD4+及CD8+淋巴细胞百分比均显著上升尤其以CD8+上升幅度更大。血浆IFN-γ分别为 375.40±13.11、301.96±23.60、478.43±17.50（pg/ml），血浆IL-10分别为 27.35±2.81、28.55±0.72、21.47±1.34（pg/ml），VD-组较其他两组血浆IFN-γ显著上调而IL-10显著下调。三组脾淋巴细胞增值刺激指数分别为1.47±0.12、1.15±0.11、0.65±0.16，VD-抑制了脾脏T淋巴细胞在TB-PPD刺激下的增殖能力，其中VD-组淋巴细胞出现显著凋亡。.另外，采用VDD与维生素D水平正常的小鼠骨髓细胞，加入rmGM-CSF诱导成树突状细胞，经结核杆菌脂蛋白刺激成熟后，发现：MHCII、CD86的表达及混合淋巴细胞反应增殖能力，VDD组比维生素D水平正常组高；而且树突状细胞分泌IL-4的水平，VDD组比维生素D水平正常组高；但是，IL-2, IL-6, IL-10 和 IFN-γ水平，VDD组比维生素D水平正常组低。VDR与CYP27B1在维生素D缺乏组与正常组的差异，随着维生素D的增高，VDR 和CYP27B1的表达上调。.结论：1、通过控制食物和光照，成功建立VD缺乏小鼠动物模型。VD缺乏显著影响小鼠抗结核免疫功能，提示VD缺乏与结核病易感性相关。2、维生素D影响树突状细胞的成熟和功能,维生素D通过调节树突状细胞表面的VDR和CYP27B1的表达来调节免疫避免过度免疫应答。.