TLR4/NF-kB信号传导在PRRSV云南株致仔猪ARDS氧化应激损伤中的作用及其机制研究

细胞和机体的氧化应激损伤在病毒感染所致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的生物学作用日益受到重视，现已成为一个新的研究方向和热点，但目前有关TLR4/NF-kB信号传导在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)致仔猪ARDS氧化应激损伤中的作用及其机制在国内外尚未见文献报道。本研究拟用PRRSV云南分离株建立仔猪ARDS感染模型，运用Real-time PCR技术、流式细胞术、Western-blotting、免疫组织化学等技术，探讨PRRSV在感染猪肺泡巨噬细胞和肺脏组织过程中自由基和抗氧化能力是否失衡、病毒基因转录水平的改变、自由基-TLR4/NF-kB信号传导通路中受体基因转录及蛋白表达的动态变化与调控ARDS的关系。以期从氧化应激的角度揭示PRRSV感染导致仔猪ARDS的分子机制，这对于丰富并提升PRRSV与细胞和机体相互作用的认识水平具有重要的科学意义，为病毒性疾病的防制提供新的思路。

PRRSV感染后主要造成弥漫性间质性肺炎、肺水肿等肺脏损伤，严重时可引起仔猪急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)，表现为进行性呼吸困难和顽固性低氧血症为特征的急性呼吸衰竭。本研究想回答以下问题：PRRSV在体内外感染的状态下，机体或细胞的氧化氧化应激是否受到损伤？其分子机制是什么？. 我们运用化学发光法、Real-time PCR技术、流式细胞术(flow cytometry, FCM)、Western-blotting技术、免疫组织化学等技术，探讨PRRSV在感染猪肺泡巨噬细胞和肺脏组织过程中自由基和抗氧化能力是否失衡、病毒基因转录水平的改变、自由基-TLR4/NF-B信号传导通路中各种受体基因转录及蛋白表达的动态变化与调控ARDS的关系。. 研究结果表明：1. PRRSV感染可使PAMs产生明显CPE，其机制是PRRSV感染PAMs可诱导胞内呼吸爆发的产生过多的自由基，降低抗氧化酶的活性；氧化剂的预处理接毒组可使PAMs出现CPE的时间提前；抗氧化预处理接毒组PAMs出现CPE的时间延迟。2. PRRSV感染可导致仔猪ARDS，氧化应激损伤可以启动ARDS。3. PAMs表面的TLR3表达增加是PRRSV导致PAMs氧化应激损伤的机制之一，并启动TLR3-NF-κB信号通路，随着时间的延长，PRRSV mRNA转录水平与TLR3、NF-κB转录水平呈正相关。4. 抗氧化剂和促氧化剂可引起PAMs氧化应激状态的改变，从而导PRRSV mRNA转录及蛋白水平的变化，TLR3/ NF-κB信号传导通路是其调节的分子机制之一。研究结果对于丰富并提升PRRSV与细胞和机体相互作用的认识水平具有重要的科学意义，为抗氧化剂在治疗PRRSV所引起ARDS的应用提供了理论基础和技术支撑。