特异性抑制Indian Hedgehog信号传导通路治疗软骨肉瘤的实验研究

临床上软骨肉瘤面临的主要难题是对化疗和放疗皆不敏感，手术是唯一的治疗方法。肿瘤切除后局部复发率高，即使半盆截肢术仍出现肺转移，目前没有有效控制软骨肉瘤复发和转移的手段。Indian Hedgehog信号传导通路在软骨的生长发育中起到重要作用。软骨肉瘤的产生与Indian Hedgehog信号通路的负反馈机制紊乱，持续活化有关。本实验运用免疫组化对比正常软骨，软骨瘤，高分化以及II、III级软骨肉瘤Indian Hedgehog信号通路分子蛋白的差异。采用特异性siRNA干扰技术沉默信号通路重要蛋白Gli1，观察通路下游分子的改变及对软骨肿瘤细胞和裸鼠接种肿瘤体积的影响。同时采用腺病毒Gli1过表达载体转染Gli1敲除的单克隆软骨肉瘤细胞系，观察对该通路的逆转作用及增殖和凋亡的影响。希望为临床治疗软骨肉瘤提供一个有效的手段。同时深入研究该通路在软骨肉瘤发病机制中的作用。

临床上软骨肉瘤面临的主要难题是对化疗和放疗皆不敏感，手术是唯一的治疗方法,GLI1转录因子在Indian Hedgehog信号通路中的作用机制及其在软骨肉瘤靶向治疗中的价值。运用免疫组化对比正常软骨与软骨肉瘤Indian Hedgehog信号通路的差异；选取软骨肉瘤细胞系SW135和JJ012，采用特异性siRNA干扰技术沉默信号通路重要蛋白GLI1 ，用RT-PCR与Western blot观察通路下游分子的改变，流式细胞仪检测细胞周期与凋亡的变化，电镜，免疫荧光检测细胞自噬的发生。我们发现在软骨肉瘤中Indian Hedgehog信号通路是活化的，主要表现在关键蛋白IHH, PTHrP,PTCH,SMO,Gli1的过表达以及Gli1的异位表达，在软骨肉瘤细胞系SW135和JJ012中，敲减Gli1的表达后抑制了细胞的增值，诱导细胞G2/M的周期阻滞并降低细胞周期蛋白cycliB1的表达及RB蛋白的磷酸化，同时促进了软骨肉瘤细胞的凋亡，其凋亡机制为抑制了BCL-2与BCL-XL的表达，进一步研究发现沉默Gli1的表达诱导了细胞自噬的发生。沉默GLI1基因抑制了软骨肉瘤细胞的增值，诱导细胞周期阻滞、凋亡及自噬的发生，为临床治疗软骨肉瘤提供一个有效的手段。