SM-ɑ基因启动子区特异位点在2型糖尿病血管并发症中VSMC表型转换的分子机制研究

胰岛素抵抗及其代偿高胰岛素血症是2型糖尿病患者血管并发症的主要原因之一。也是临床亟待解决的重要问题。其病理机制与血管平滑肌细胞（VSMC）表型转换后血管舒张收缩功能异常密切相关。已证实SM-α是决定VSMC表型转换的关键分子，该基因表达下调水平和与胰岛素刺激浓度、时间正相关，但在糖尿病患者血管中检测 SM-α表达却呈现显著的个体差异。据以上研究，我们前期对糖尿病患者的SM-α启动子区进行研究，发现SM-α启动子区（-1118C/T）位点是最可能影响SM-α等位特异性表达的多态性功能位点。本研究拟采用EMSA、荧光素酶报告基因试验、序列删减分析、等位特异性染色质免疫沉淀及流式细胞检测技术等手段，观察启动子区域C/T位点等位特异性顺式调控作用，并观察这种等位变异对胰岛素刺激VSMC的SM-α表达及细胞表型及生物学功能的影响，以期阐明SM-α 基因特异位点在2型糖尿病患者血管并发症的机制。

研究背景：.ACTA2（SM-）基因编码的SM-是收缩型VSMC的标志性蛋白。VSMC表型转化在冠脉病变中起非常重要的作用。因此，对ACTA2 基因的研究尤为重要。假设ACTA2 基因启动子区某些单核苷酸多态性可能参与其转录，改变VSMC 表型，促使VSMC增殖、迁移等参与了冠状动脉性心脏病的发生发展。胰岛素促冠脉病变作用存在很大争议。本项目针对胰岛素是否与ACTA2单核苷酸多态性共同参与 2 型糖尿病患者冠状动脉的病变进行相关研究.研究内容：明确胰岛素与ACTA2 基因启动子区单核苷酸多态性共同作用参与 2 型糖尿病患者冠状动脉病变发生.研究结果：.1.证实rs1324551 位点在病例组和对照组间存在显著差异性。rs1324551的 G 等位基因频率和 GG 基因型频率在病例组和对照组中频率分别依次是 61.9%、52.4%和 39.9%、25.3%，病例组中的 G 等位基因频率和 GG 基因型频率均明显高于对照组(P=0.044、P=0.001）。提示 rs1324551 GG 基因型增加 2 型糖尿病患者冠状动脉狭窄病变的风险性；.2.在附加模型和隐性模型中 GG 基因型促冠状动脉狭窄的 OR 值分别为 2.93（95%CI：1.05～8.19，P=0.04）、2.34（95% CI：1.09～5.02，P=0.03），提示rs1324551 位点与冠状动脉狭窄程度的关联性表现在低胰岛素组中，2 型糖尿病患者病例组中的三支以上冠状动脉病变比例高达 65.5%；.3. 隐性模型中，年龄和吸烟两项危险因素促冠状动脉狭窄病变的调整后 OR 值分别是 1.06（ 95%CI 1.02～1.20, P=0.007）、10.59（95%CI 1.27～88.11,P=0.03)，提示2 型糖尿病并发冠状动脉性心脏病者冠状动脉呈弥漫性病变，高龄和吸烟可独立增加 2 型糖尿病患者冠状动脉狭窄病变的风险；.4. 胰岛素能下调VSMC ACTA2 基因启动子区转录因子AP-1表达，进而抑制表型转换标志蛋白ACTA2（SM-）的表达，促使VSMC增殖及表型转化，加速血管动脉粥样硬化。