米格列奈介导的自噬调节对缺血性脑卒中保护作用的研究

Mitiglinide is a new hypoglylemic agent.Previous studies have focused its effects on diabetes therapy.However,the effect of mitiglinide on neuroprotection was unclear. Our previous study found that mitiglinide could improve brain injury in a mice ischemia reperfusion model.In vitro,we found mitiglinide could inhibit cell death by inducing autophagy in OGD/R (oxygen-glucose deprivation and reperfusion) model.In this project，we plan to make futher research on the autophagy regulatory mechanism of mitiglinide in ischemic stroke.First,we will confirm the protective effect of mitiglinide in vivo and vitro,and futher explore the treatment-window in vivo.Moreover,we will investigate whether mitiglinide exhibit the neuroprotection effect through regulate autophagy(induce or inhibit)in vivo and vitro.The regulatory mechanism of mitiglinide on autophagy will also be investigated in vitro.Our study will be helpful to develop the therapeutic strategies of ischemic stroke.

米格列奈（mitiglinide）是一种新型降糖药物。过去研究只关注其在糖尿病治疗中的作用，而在神经保护方面的作用未见报道。我们的前期研究发现，米格列奈对脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用，且治疗时间窗较长。同时，在细胞实验中发现，米格列奈在损伤早期可通过促进自噬发挥神经保护作用。本项目拟在原有工作基础上，制备缺血再灌注动物模型，在整体水平上进一步研究、阐明在脑卒中过程中，米格列奈是否通过调节自噬发挥神经保护作用，改善脑损伤；同时在细胞实验中，建立氧糖剥夺复灌模型，深入研究米格列奈通过调节自噬发挥神经保护作用的具体机制。预期结果不仅为脑卒中临床治疗提供新的策略，也为研究脑卒中提供新的思路。

米格列奈（mitiglinide）是一种新型降糖药物。过去研究只关注其在糖尿病治疗中的作用，而在神经保护方面的作用未见报道。本研究应用OGD细胞模型及小鼠tMCAO模型，发现米格列奈能在不影响血糖的情况下，减轻OGD所致神经元损伤及tMCAO所致脑梗死，对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用，为米格列奈对缺血性脑卒中的临床治疗提供了新的实验依据。我们的整体研究发现，米格列奈减小tMCAO所致脑梗死体积，减轻运动神经功能障碍，降低脑含水量。培养Neuro-2a细胞、SH-SY5Y细胞、小鼠原代皮层神经元，建立细胞OGD模型，发现米格列奈提高OGD损伤神经元活力，减轻OGD所致神经元凋亡。显微镜下细胞形态结果提示米格列奈有效维持OGD损伤神经元的细胞形态。上述结果表明米格列奈对OGD损伤神经元具有保护作用。此外我们发现，米格列奈促进OGD-复糖复氧早期神经元LC3Ⅱ表达，降低p62表达。转染了GFP-LC3、mTagRFP-Wasabi-LC3质粒的Neuro-2a细胞，结果显示米格列奈能促进OGD后神经元中自噬小体、自噬溶酶体的形成，自噬流过程通畅。而tMCAO小鼠脑片免疫荧光结果显示米格列奈促进tMCAO小鼠神经元自噬。Western Blot结果亦显示米格列奈促进缺血半影区脑组织LC3Ⅱ表达，并降低p62表达。预孵育或侧脑室注射自噬抑制剂3MA后，米格列奈的神经保护作用部分取消。结果表明米格列奈通过诱导自噬减轻缺血或氧糖剥夺所致神经损伤。进一步地，我们探索机制发现米格列奈通过可调节mTOR、AMPK磷酸化水平来促进自噬。综上所述米格列奈可通过调节mTOR及AMPK通路诱导自噬并进而减轻神经元损伤，发挥对脑缺血的神经保护作用。本研究也为脑卒中研究提供新的思路。