含α(2,8)三唾液酸结构单元的神经节苷脂GT3的全合成、荧光标记与细胞膜探针研究

Ganglioside GT3 is a kind of tumor-associated carbohydrate antigen, which is over expressed on the surface of breast cancer cell. GT3 is a complex acidic glycosphingolipid bearing α(2,8) trisialic acid moiety in its structure. It is high challengeable to achieve the total synthesis of GT3 due to its molecular complexity. Based on our previous study on sialic acid chemistry and fluorescent detection, herein, we will perform the chemical biology research of ganglioside GT3. ..Firstly, the project will focus on the development of novel sialyl sulfoxide donors with good reactivity, high glycosylation yield and excellent α-selectivity, and construct α(2,8) trisialic acid moiety by one-pot synthetic strategy to accomplish the total synthesis of GT3. Secondly, we will design and synthesize new phosphonium-based dyes with high sensitivity and strong fluorescence, and prepare various types of GT3 fluorescent markers. Thirdly, the proposal will explore the possibilities in cancer cell study with GT3 fluorescent markers as cell membrane sensors, which would be helpful for the understanding of cancer pathogenesis at molecular level. ..This project will give powerful supports to the synthesis and biological study of complex sialylconjugates, efficiently to accelerate the development of sialic acid chemistry, biology and related fields.It is hoped that current research should have important theoretical values and broad application prospect.

神经节苷脂GT3是在乳腺癌细胞膜表面过量表达的一种肿瘤相关糖类抗原。其分子结构中含有α(2,8)三唾液酸结构单元，是一种结构复杂的酸性鞘糖脂。由于GT3分子的复杂性，对其进行化学全合成具有很高的挑战性。本项目将在课题组以往唾液酸化学和荧光检测研究的基础上开展神经节苷脂GT3的化学生物学研究。我们将发展反应活性、糖苷化产率、α立体选择性俱佳的新型唾液酸亚砜苷糖基给体，一釜合成法构建α(2,8)三唾液酸结构单元，实现神经节苷脂GT3的全合成；设计合成新型基于鏻盐的高灵敏、强荧光的染料分子，制备各种类型的GT3荧光标记物；探究其作为细胞膜探针在肿瘤细胞研究中的应用，期望从分子水平上对深入阐释肿瘤的发病机制提供有益帮助。本课题的开展将为复杂唾液酸糖缀合物的合成与生物活性研究提供强有力的支持，有效促进唾液酸化学和生物学相关研究领域的发展，具有重要的理论价值和广阔的应用前景。

唾液酸是一类九碳糖酸化合物，广泛存在于生物体的组织中。大量的研究表明唾液酸具有重要的生物学功能，在抗炎、抗肿瘤、抗病毒治疗等方面发挥着极为重要的作用。本课题在前期工作的基础上，制备了N-乙酰基-5-N,4-O-噁唑烷酮保护的唾液酸亚砜苷，并成功地将其应用于糖苷化反应，获得了很高的α立体选择性(α/β > 10:1)。这一研究结果的取得解决了近二十多年来有关唾液酸亚砜苷是否可以作为糖基给体的争论。我们以7, 8, 9-三-O-氯乙酰基-5-N, 4-O-噁唑烷酮保护的对甲基苯硫苷为给体，经过12步反应，以10%的总产率获得了α (2, 9)三唾液酸寡糖化合物。在合成的关键糖苷化反应中，使用的是(p-Tol)2SO/Tf2O做为糖苷化促进剂。而后，用菁染料（Cy3/Cy5）通过点击化学成功地标记了唾液酸三糖，以其为探针实现了PC-12细胞膜表面涎免凝素（siglec）的共聚焦荧光成像，并通过Cy3和Cy5之间的FRET效应，研究了涎免凝素在细胞膜上的空间分布。该研究为深入研究唾液酸糖缀合物在细胞中的转运和代谢等生物过程奠定了良好的基础。此外，我们还开展了基于柔性硼酸受体的复杂糖缀合物识别与检测的研究，成功地实现了对系列单糖、双糖以及人参皂甙的的区分性检测。本课题的开展将有效促进复杂糖缀合物相关的化学和生物学研究的发展，具有重要的理论研究价值和潜在的应用前景。