化痰散结方对乳腺癌干细胞凋亡耐药及相关Hh信号传导通路的干预研究

Resistance is one of the key factors leading to malignant tumors refractory and recurrence. Numerous studies show that the drug resistance of tumor is rooted in the cancer stem cells' drug resistance. Apoptosis resistance is an important mechanism of cancer stem cells' drug resistance. The dissipating phlegm and resolving masses prescription is an anti-breast cancer prescription. Through the preliminary experimental study, we found the prescription could reverse the multidrug resistance of breast cancer. And we also confirmed that it played its role in reversing drug resistance by inducing the apoptosis of tumor cells..On the basis of preliminary experimental studies, we study the mechanisms of the dissipating phlegm and resolving masses prescription reversing apoptosis resistance for cancer stem cells. Firstly, we identify the characteristics after the breast cancer stem cells in MCF-7/ADM are isolated by SP method. Secondly, we choose the anti-apoptotic gene Bcl-2 as the studying target to study the reversal effect of multidrug resistance for the cancer stem cells from the apoptosis-resistant way. Finally, we observe the role of Ptch1, Smo and Gli1 in stem cells Hh signaling pathway which is related with cell apoptosis. We will explore the molecular mechanisms of reversing apoptosis resistance..Chinese medicine affecting cancer stem cells' resistance is the new direction of cancer drug resistance research field. Through the study of stem cell-related Hh signaling pathway, the topic will reveal the intrinsic mechanism of Chinese medicine reversing apoptosis resistance and provide theoretical basis and a new target for Chinese medicine treatment of cancer.

耐药性是导致恶性肿瘤难治、复发的关键因素之一。大量研究表明，肿瘤耐药根源于肿瘤干细胞的耐药性，而凋亡耐药是肿瘤干细胞耐药的重要机制。前期实验研究表明，抗乳腺癌协定方-化痰散结方能够逆转乳腺癌细胞的多药耐药，并能通过干预凋亡介导的耐药来发挥其逆转耐药的作用。.在前期工作基础上，我们针对肿瘤干细胞进一步研究化痰散结方逆转凋亡耐药的机制。首先SP法分离MCF-7/ADM中的肿瘤干细胞，并鉴定其干细胞特性；继而以抗凋亡基因Bcl-2为研究指标，从凋亡耐药的途径观察化痰散结方对肿瘤干细胞的耐药逆转作用；最后研究其对干细胞中凋亡相关的Hh信号传导通路中Ptch1、Smo、Gli1的影响，探讨其逆转凋亡耐药的分子机制。.中药对肿瘤干细胞耐药性的影响，是肿瘤耐药研究领域的新方向。通过对干细胞相关信号传导通路的研究揭示化痰散结方逆转凋亡耐药的内在机制，为中药逆转肿瘤耐药提供理论依据和新靶点。

耐药性是导致恶性肿瘤难治、复发的关键因素之一。大量研究表明，肿瘤耐药根源于肿瘤干细胞的耐药性，而凋亡耐药是肿瘤干细胞耐药的重要机制。前期实验研究表明，抗乳腺癌协定方—化痰散结方能够逆转乳腺癌细胞的多药耐药，并能通过干预凋亡介导的耐药来发挥其逆转耐药的作用。在前期工作基础上，我们针对肿瘤干细胞进一步研究化痰散结方逆转凋亡耐药的机制。首先SP法分离MCF-7/ADM中的肿瘤干细胞，并鉴定其干细胞特性；继而以抗凋亡基因Bcl-2为研究指标，从凋亡耐药的途径观察化痰散结方对肿瘤干细胞的耐药逆转作用；最后研究其对干细胞中凋亡相关的Hh信号传导通路中Smo、Gli1的影响，探讨其逆转凋亡耐药的分子机制。中药对肿瘤干细胞耐药性的影响，是肿瘤耐药研究领域的新方向。通过对干细胞相关信号传导通路的研究揭示化痰散结方逆转凋亡耐药的内在机制，为中药逆转肿瘤耐药提供理论依据和新靶点。本课题通过以上研究揭示化痰散结方逆转凋亡耐药的内在分子学原理，将中药逆转耐药的机理研究向肿瘤干细胞生物属性的研究层面推进。对深入阐发中药抗癌机制具有理论探索和实践指导意义。. 相关研究结果如下:（1）流式分选观察非SP细胞和SP细胞的形态；并分析CD44+/CD24-乳腺癌干细胞比例，结果显示：SP细胞中 CD44+/CD24-比例（42.38±4.93）%，较非SP细胞（9.27±0.74）%增高4.57倍；免疫荧光法检测显示：SP细胞中ALDH1的表达量（27.33±7.07）%较SP细胞（0.67±0.97）%中的明显增高；免疫蛋白印迹法检测显示：与非SP细胞相比，乳腺癌SP细胞中的ALDH1、Smo、Gli1蛋白表达水平明显增高。（2）不同浓度化痰散结方血清作用于SP细胞后，可显著下调细胞凋亡抑制基因 Bcl-2 的表达，与对照组比较有统计学意义（P<0.01），且具有一定的量效关系(P<0.05)。（3）不同浓度化痰散结方血清作用于SP细胞后，与未经化痰散结方含药血清作用的SP细胞相比，Gli1和Smo mRNA表达下降，且表现为浓度依赖性。. 化痰散结方通过调控Hedgehog信号通路下调Bcl-2抗凋亡基因的表达，从干预细胞凋亡的途径逆转乳腺癌干细胞的耐药。