一种新病毒-BYDV单克隆抗体制备及抗体结合的结构基础研究

BYD病毒是一种2010年新发现的病毒，根据我们早期的流行病学调查，疾病感染迅速蔓延至中国各养鸭重省市，包括江西、山东、河北、江苏和北京。疾病影响产蛋鸭，感染鸭包括北京鸭和麻鸭，给养鸭业造成了巨大的经济损失。通过基因组测序分析发现，此病毒最接近的是黄病毒科黄病毒属Nataya virus group中的Tembusu virus。黄病毒中Envelope (E)蛋白是病毒毒力主要组成部分，其中第三结构域（EDIII）是病毒与受体结合、穿入融合等功能有关的关键蛋白。本研究拟制备BYD病毒EDIII特异性的单克隆抗体，并建立抗原捕获ELISA体系。拟对EDIII蛋白的晶体制备条件进行优化，世界上第一次获得BYD病毒蛋白EDIII蛋白晶体结构，分析其蛋白结构与蛋白功能的关系。将单克隆抗体和EDIII蛋白的共结晶后，解析EDIII蛋白与抗体作用复合物三维结构，从结构生物学角度分析抗原抗体结合的结构

BYD病毒（BaiYangDian缩写），又被命名为鸭产蛋下降综合征病毒（Duck egg drop syndrome virus, DEDSV），是一种新发现的黄病毒，能够引起鸭一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病，2010年在我国各主要养鸭省市影响包括北京鸭和麻鸭在内的多种产蛋鸭，感染鸭呈现出最突出的临床症状就是采食量下降伴随产蛋率的骤降，直至停产甚至没有鸭苗，造成了巨大的经济损失。我们对该疾病进行了系统的流行病学调查、病原分离、动物回归试验、病理学研究和病毒全基因组测序，证实了该疾病的元凶是一种新的黄病毒，并参照黄病毒命名规则对其命名。我们从DEDSV中克隆出E蛋白Ⅲ结构域的基因序列，并表达出了E蛋白Ⅲ结构域蛋白，并制备了E蛋白Ⅲ结构域和全病毒的小鼠和兔多抗，并进行了蛋白晶体结构的初步探索。我们又进行了一系列的DEDSV验证工作，在这项研究中，我们比较了7株DEDSV序列，包括N端和C端在内的全序列，还与TMUV 和 STWV的开放阅读框序列进行了比较，并对包括其5’和3’NCR在内的全基因序列及开放阅读框进行了比较。证实DEDSV、TMUV 和 STWV这三种病毒具有较高同源性，进一步进行的抗原交叉反应分析表明，DEDSV对人类有潜在的感染可能性。还通过研究发现黄病毒广谱中和抗体2A10G6可以高亲和力识别DEDSV，这为DEDSV可以通过单克隆抗体的办法进行治疗提供了一个有效方法。.还对DEDSV的流行病学做了初步调查，采用攻毒实验给1日龄雏鸡注射DEDSV。观察实验动物的病理学变化，然后用RT-PCR和多抗对实验动物进行了病毒检测利用。结果显示，攻毒后的雏鸡体内未检测到病毒，也没观察到典型的病理变化。