云南松松塔中抗HIV-1的活性物质基础及其作用机制研究

The material basis for efficacy and mechanism of anti-HIV in Pinus yunnanensis Fr. remains unclear, though a potent part, named 3-YN-F, along with 40 pure compounds, 12 articles, and 1 Chinese invention patent have been achieved in our previously research. 3-YN-F extracted from P. yunnanensis was found capable to significantly inhibit HIV-1 replication with relatively low cytotoxicity. In this proposed research, we will further apply advanced techniques to study the active compounds isolated from 3-YN-F, the antiviral fraction from Pinus yunnanensis, and test their in vitro and in vivo anti-HIV properties. The study objectives include exploring the activity being governed by a single component or components produced by synergy, and clarifying the bioactive materials of P. yunnanensis against HIV. Furthermore, we plan, on the cellular and molecular levels, to study the inhibitory effect on HIV-1 cell cycle of replication with the aspects of virus adsorption, fusion, reverse transcriptase, protease, and integration of enzyme, with the attempts of making clear its target point and determing the mechanism of anti-HIV of Pinus yunnanensis. The results will lay an important science foundation for the development of anti-AIDS agent with the protection of intellectual property.

云南松松塔中抗HIV-1的活性物质基础和作用机制尚未完全清楚。本项目在申请人前期获得了云南松松塔中抗HIV-1活性极显著的部位3-YN-F、分离鉴定出40个化合物、发表了12篇论文、申请了1项专利的基础上，拟在体外活性追踪及体内实验结果指导下，应用现代科学新技术新方法，通过分离鉴定活性部位中的各个化合物；研究组成3-YN-F的物质基础；测试从活性部位中获得的各个化合物对HIV-1感染细胞的保护作用、对HIV-1致细胞病变以及相关因子的抑制作用，探讨活性部位抗HIV-1的活性是由单一成分产生还是由多成分协同作用产生，从而阐明组成活性部位的物质基础。在上述基础上，从细胞和分子水平上，研究其对HIV-1复制周期的吸附、融合、逆转录酶、蛋白酶、整合酶等多个靶标的抑制作用，明确其作用靶点，以阐明其抗HIV-1的作用机制。研究结果将为我国最终研发出一种具有完全自主知识产权的抗艾滋病新药奠定重要基础。

本项目主要针对云南松松塔及其中的抗HIV-1活性物质基础和作用机制尚未完全清楚这一主题立项，先后进行了30余方面一系列的研究，体现在：.(1)与物质基础密切相关的15个方面研究：包括又新分离鉴定出31个化学结构清楚的化合物；明确了云南松松塔抗HIV-1的活性物质基础主要为木质素-多糖复合体；分析测定出活性部位中的木质素含量为37.5%、多糖含量为31.9%及多糖所含的单糖种类和组成比；建立了抗HIV-1活性部位的指纹图谱；优化提取分离工艺；云南松松塔药材质量标准研究等。.(2) 进行了抗HIV-1活性及其作用机制等方面的研究：包括对云南松松塔、思茅松松塔等10个提取物进行了全面而系统的抗HIV-1活性研究，筛选出了活性最好的部位0309，其治疗指数TI>2906。获得了其抗HIV-1的作用机制是在抑制病毒的进入阶段发挥作用之科学数据。. (3)针对活性部位成药性及今后综合开发利用云南松松塔的前景进行了10个方面的研究：包括为扩大资源，扩展了对思茅松、华山松等松属植物的化学成分及相关活性方面的研究；云南松松塔抗HIV-1活性部位的急性毒性、免疫功能、抗肝纤维化作用、指纹图谱研究等。.（4）新发现所获得抗HIV-1活性物质同时也具有较好的抗癌活性：进行了对人肺癌细胞、肝癌细胞作用等的研究。.（5）新的重要进展：已将抗HIV-1活性物质研制为云松精胶囊，并将其后续研究“抗HIV天然药物5类新药云松精胶囊的临床前预研究”项目向云南省科技厅作为重点项目申请，申请总经费为176万元。现已通过专家组的立项审核和答辩。.（6）已发表论文34篇，另有3篇接到刊用通知；新申请专利一项,获准授权专利一项。培养硕士研究生11名；培养青年教师7名。.该项目的成功实施，基本明确了云南松松塔和其中的抗HIV-1的活性物质基础及其作用机制。同时，为该活性部位的成药性及今后综合开发利用云南松松塔奠定了重要基础。