髓细胞触发受体1（TREM-1）对猪链球菌2型感染的识别、应答及其致炎性紊乱机制的研究

猪链球菌2型（SS2）诱导炎性紊乱是导致中毒样休克（STSLS）的重要原因，是致病机制研究亟待解决的关键和核心问题之一。髓细胞触发受体1（TREM-1）在炎性放大过程中发挥重要作用，是当前炎性紊乱研究中的关键分子之一，但其配体及活化机制并不清楚。前期研究表明SS2感染可显著上调TREM-1表达，并在致病中发挥重要作用。本研究拟通过生物素标记TREM-1，垂钓其配体，经质谱分析，鉴定TREM-1的配体。从TLR2、TLR3或IL1R等SS2诱导的炎性通路中鉴定TREM-1上调表达的信号通路。并对配体和信号通路进行阻断或强化，在细胞和实验动物上对炎性因子表达水平及其致病性进行评价。力图阐明TREM-1在SS2感染后是通过识别何种配体、应答何种信号通路而活化，及其该配体及信号通路在致炎性紊乱中的作用，为阐明SS2致炎性紊乱的分子机制奠定重要基础。同时为治疗TREM-1介导的疾病提供潜在治疗靶标。

猪链球菌2型（SS2）诱导高水平的炎症应答是导致中毒样休克（STSLS）以及致死的重要原因，也是致病机制研究亟待解决的关键和核心问题之一。髓细胞触发受体1（TREM-1）在炎症信号放大过程中发挥重要作用，参与多种炎症反应。而且其识别的信号分子并不清楚。因此，阐明其在STSLS中作用及其机制对于解析猪链球菌病的致病机制具有重要意义。.本项目（1）基于TREM-1识别信号分子位于血小板上的研究进展，通过酵母双杂交系统、SPA树脂垂钓TREM1-Fc互作蛋白、以及融合His-FLAG双标签的TREM-1蛋白垂钓其互作蛋白三种方法开展了血小板中TREM-1互作蛋白的研究，并通过质谱分析，成功垂钓并鉴定了TREM-1的互作蛋白Actin。证实在炎症反应时，两种蛋白可在炎症细胞表面定位，说明Actin在炎症发生时可位于细胞表面，与胞外TREM-1的互作不存在空间障碍。本项目还基于细胞模型，进一步说明了重组Actin可呈剂量依赖性地增强LPS诱导的炎性应答；而且该效应可被TREM-1信号通路抑制剂所抑制；另外Actin抗体可呈剂量依赖性地阻断血小板强化LPS诱导的炎性应答；且Actin抗体可阻断TREM-1与血小板表面的结合。说明Actin即为血小板上TREM-1识别的配体。（2）通过构建的myd88、以及tlr2、tlr4基因缺失的单核细胞系对SS2诱导TREM-1上调的信号进行了研究，发现与激活炎症信号通路一样，SS2主要通过TLR2/MyD88信号通路上调TREM-1受体的表达。（3）利用TREM-1的抑制剂和激活剂研究该信号通路在SS2感染中的作用，发现TREM-1信号通路一方面在中性粒细胞活化或趋化过程中发挥重要作用，从而介导猪链球菌的清除，在细菌的抗感染免疫中发挥重要作用。另一方面在感染的后期，该信号通路则介导炎症信号通路的进一步放大，在猪链球菌致STSLS中发挥重要作用。而且本研究进一步发现并证实重组胞外域配合抗生素治疗可通过“抑菌”和“消炎”两方面的作用显著改善猪链球菌感染后的治疗效果。.本项目对TREM-1在细菌致病过程中的作用及其机制进行了系统解析。同时发现TREM-1信号通路可作为猪链球菌病治疗的重要靶标。本研究结果对于阐释其他病原菌致炎症的机制及其治疗均具有重要借鉴意义。本项目发表SCI研究论文4篇，获国家授权发明专利1项，获湖北省科技进步一等奖。