从基底核腺苷/多巴胺受体途径探讨疏肝安神法调控失眠大鼠睡眠/觉醒周期的机制

Chinese medicine, it is indeed effective as adjunctive therapy in the treatment of insomnia. In order to further develop the Chinese medicine treatment of insomnia characteristics and advantages, this project on the basis of previous studies (1) Insomnia rat model was used to shugan anshen drugs verification, combining with the sleep biological analysis system, from the change of the rats sleep/wake cycles, discusses shugan anshen method how to improve the rat sleep quality. Analysis of similarities and differences between Chinese medicine and Western medicine in improving the quality of sleep. (2) Based on rat basal ganglia associated adenosine and dopamine receptor pathway, we explore the molecular mechanism of shugan anshen method to improve sleep quality from the expression of related genes and protein changes. (3) We establish the cell system of basal ganglia in vitro, use quantitative PCR and Western blot techniques to detect the gene and protein expressions after treated with shugan anshen drugs or combine with inhibitors of pathway. This study reveals that the traditional Chinese medicine how to improve sleep, and the difference with the western medicine through scientific and objective manner. Provide experimental basis for the further advancement of Chinese medicine treatment of insomnia.

临床上作为辅助疗法的中医药治疗失眠确有疗效。为了进一步发挥中医药治疗失眠的特色和优势，本课题在前期研究的基础上（1）采用失眠大鼠模型，以疏肝安神法方药验证，结合睡眠生物解析系统，从大鼠睡眠/觉醒周期的改变，探讨疏肝安神法如何改善大鼠睡眠质量。分析中药和西药在改大鼠善睡眠质量上有何异同。（2）从大鼠基底核腺苷和多巴胺受体途径相关基因、蛋白的表达变化，分析疏肝安神法改善睡眠质量的机制。（3）建立体外基底核神经元细胞体系，采用定量PCR和Western-blot技术检测疏肝安神法方药与腺苷A2A受体、多巴胺D2受体抑制剂单独和联合运用后该通路相关基因和蛋白表达变化，进一步体外验证。本研究通过科学、客观的方式揭示了中药如何改善睡眠，以及与西药的差异，为进一步提高中医药治疗失眠的地位提供了实验依据。

临床上失眠多以肝郁为主，前期研究证实疏肝安神法治疗失眠疗效确切，其作用机制与调节多巴胺（DA）和腺苷等神经递质相关。本课题采用失眠大鼠模型，给予松郁安神方（SYF）治疗，结合睡眠生物解析系统，从睡眠时相改变上分析SYF如何改善大鼠的睡眠质量，以及与西药作用差异。研究结果发现：SYF能够延长失眠大鼠SWS1、SWS2和REMS期睡眠时间，提高失眠大鼠的总睡眠时间（TST）。同时，SYF还可以减少睡眠潜伏期（SOL）时间。阿普唑仑同样可以延长TST，缩短SOL。但是，两者具体调控又有差异。SYF在增加SWS2和REMS期睡眠时间上优于阿普唑仑，阿普唑仑在缩短SOL和延长SWS1期时间上优于SYF。结果表明，SYF对睡眠时相的改变更接近生理性睡眠，在改善睡眠质量上优于阿普唑仑。课题进一步利用Elisa、定量PCR和Western-blot等技术检测大鼠基底核腺苷和DA受体途径相关基因、蛋白的表达变化，分析疏肝安神法改善睡眠质量的机制。结果显示：SYF显著增加失眠大鼠基底核腺苷的释放，减少DA的释放。SYF显著上调失眠大鼠基底核腺苷A2AR蛋白和mRNA的表达，下调多巴胺D2DR蛋白和mRNA的表达。最后，利用体外基底核神经元细胞模型，更深一步验证疏肝安神法改善睡眠质量的机制。结果显示：SYF能够通过上调神经元细胞腺苷A2AR受体蛋白和mRNA的表达，下调多巴胺D2DR受体蛋白和mRNA的表达，影响神经元细胞增加腺苷和减少DA等神经递质的释放。以上实验结果表明：疏肝安神法在改善失眠大鼠睡眠质量上优于西药组。其机制与调控基底核腺苷A2AR受体和多巴胺D2DR受体途径，影响神经元细胞释放腺苷、DA等神经递质相关。该研究揭示了中药如何改善睡眠，以及与西药的差异，为进一步提高中医药治疗失眠的地位提供了实验依据。