MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在脑出血后血脑屏障保护中的作用及其机制研究

The mechanisms of secondary brain injury after intracerebral hemorrhage (ICH) are complex, in which blood brain barrier(BBB) disruption plays an obvious role. Meanwhile, it is found that β-catenin is vital to preserve BBB integrity and MSP/RON/GAB1 signaling can protect the tight junctions between the endothelial cells. So far, no study described the role of MSP/RON/GAB1/β-catenin signaling in ICH. Our preliminary experimental results show that the levels of MSP and RON were decreased after ICH, also, MSP may preserve the BBB integrity, but the mechanisms remain to be further explored. To this end, we propose the hypothesis: MSP/RON/GAB1/β-catenin signaling can protect BBB integrity in ICH. To verify this hypothesis, we apply mice ICH model in vivo and oxyhemoglobin treated endothelial ICH model in vitro, and use methods of Western blot,immunofluorescence and RNA interference. From the molecular, cellular and body levers, we explore the role of MSP/RON/GAB1/β-catenin signaling in preserving BBB integrity after ICH and investigate the mechanism.

自发性脑出血（ICH）后继发性脑损伤的机制复杂。已有研究表明血脑屏障（BBB）的破坏在其中作用显著；β-catenin蛋白在BBB的保护中发挥重要作用；MSP/RON/GAB1信号通路能够保护内皮细胞间的紧密连接结构。迄今为止，尚没有关于MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在ICH后的作用报道。我们的预实验结果提示ICH后MSP、RON蛋白含量减少，MSP对BBB起保护作用。但其作用机制还有待进一步探讨。为此，我们提出假说：MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在ICH后对BBB有保护作用。为验证这一假说，我们应用小鼠ICH模型，体外氧合血红蛋白处理内皮细胞建立的ICH模型，采取Western blot、免疫荧光和RNA干扰等手段，从分子、细胞以及动物整体水平等多方面研究MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在ICH后BBB保护中的作用及其作用机制。

自发性脑出血后继发性脑损伤的机制复杂，已有研究表明血脑屏障（BBB）的破坏在其中作用显著；β-catenin蛋白在BBB的保护中发挥重要作用；RON的表达增加与β-catenin的表达同步，β-catenin是RON的重要的下游作用靶点；巨噬细胞刺激蛋白（MSP）可以激活RON。因此本项目开展关于MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在ICH后继发性脑损伤中作用的机制研究。我们的实验结果显示：小鼠ICH后脑组织中MSP及p-RON/RON表达下降，MSP和RON主要在内皮细胞、星形胶质细胞中表达，在神经元中表达较少。与ICH模型组相比，0.3μg rhMSP治疗组能够提高p-RON/p-GAB1/p-Src/β-catenin蛋白表达，最大程度减轻脑水肿、改善神经功能，同时BBB功能相关指标得到改善，白蛋白和伊文氏蓝染料外渗明显减少，claudin-5, occludin和 ZO-1等紧密连接蛋白的表达量明显增加。在给予RON siRNA和GAB1 siRNA的干扰后，rhMSP提高脑出血后p-RON/p-GAB1/p-Src/β-catenin蛋白表达的这一效应得到逆转；同时逆转了rhMSP的改善神经行为学功能效应。在给予rhMSP治疗的同时给予RON siRNA和GAB1 siRNA的干扰后白蛋白的渗出明显增多；rhMSP对小鼠脑出血4周后的记忆和学习能力方面有显著改善。因此我们证实MSP/RON/GAB1/β-catenin信号通路在ICH后对BBB和神经功能有保护作用。MSP可能成为ICH后继发性脑损伤的治疗新靶点。