转基因胚肝细胞移植治疗Wilson病的实验研究

本研究拟通过基因工程和细胞工程相结合的方法，首先获取孕14天的正常同系DL小鼠的胚肝细胞，免疫磁珠法纯化均有CD34、Thy-1和c-kit等表面标记的胚肝细胞，体外培养、扩增；其次，构建含有野生型ATP7B基因及标记基因GFP双顺反子的表达质粒，转染上述经纯化的胚肝细胞，筛选稳定表达克隆，一方面促进供体细胞中ATP7B基因的表达，增强其排铜的有效性，另一方面对供体细胞进行有效的遗传学标记；其次，将上述经过基因工程改建的胚肝细胞移植到WD的动物模型TX小鼠的脾脏中，跟踪观察移植后1、3、6、12月后的疗效，从血生化、铜代谢、肝脏病理学等不同角度，观察这种经基因工程改造的胚肝细胞移植后对TX小鼠铜代谢紊乱的改善程度，探讨胚肝细胞移植对WD治疗的潜在临床应用价值。