瓶尔小草属植物高黄酮抗HBV活性研究

高黄酮是黄酮C6-C3-C6骨架的C环或B环多连一个碳的特殊黄酮，这类黄酮是瓶尔小草属植物的特征化学成分。项目申请人在前期研究中从尖头瓶尔小草中分离鉴定了7个新的高黄酮苷成分，并筛选到2个具有良好的抗乙型肝炎病毒（HBV）活性的异戊烯基高黄酮苷类新化合物。此项目拟在前期研究基础上对瓶尔小草属植物中的高黄酮类成分进行较系统地分离鉴定、衍生合成与抗HBV活性筛选研究，进一步挖掘天然高黄酮资源、揭示高黄酮结构变化与抗HBV活性的关系、发现抗HBV活性化合物甚至先导化合物。项目的开展不仅能够丰富天然产物化学库，同时对抗HBV新药的研发也具有重要参考价值。

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是一种能引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒，每年约有60万人因HBV而死亡。高黄酮是黄酮C6-C3-C6骨架的C环或B环多连一个碳的特殊黄酮，这类黄酮是瓶尔小草属（Ophioglossum）植物的特征化学成分，此项目主要针对瓶尔小草属植物高黄酮组分的结构与抗HBV活性开展较为系统而深入的研究。利用各种色谱分离技术和波谱鉴定方法从尖头瓶儿小草（O.pedunculosum）中分离鉴定黄酮类化合物22个，发现新化合物14个，新化合物包括11个高黄酮（homoflavonoid）和3个3-O-甲基黄酮苷类化合物；从狭叶瓶尔小草（O.thermale）中分离鉴定黄酮类化合物6个。抗HBV活性筛选发现抗乙型肝炎表面抗原（HBsAg）分泌活性化合物 2个：尖头瓶尔小草高黄酮苷甲（OP-1）和尖头瓶尔小草高黄酮苷丙（OP-3）；构效关系研究表明糖苷化明显降低该类化合物的细胞毒性，糖基越多毒性越小，异戊烯基取代在高黄酮苷的B环对提高活性有利。系统地总结了高黄酮这一特殊类型黄酮的质谱裂解特征：I 型高黄酮（黄酮骨架的C环多连1个碳）质谱的特征裂解是从苷元离子Y0−上竞争性地脱水或脱甲醛，形成 [Y0-H2O]− 或 [Y0-CH2O]− 离子；Ⅱ 型高黄酮 （黄酮骨架的B环多连1个碳并与C环形成吡喃环D）的特征裂解是从苷元离子Y0−上竞争性地脱水或脱一氧化碳，形成 [Y0-H2O]− 或 [Y0-CO]−离子。同时建立了瓶尔小草属植物HPLC指纹图谱分析方法和一种快速寻找、区分两类高黄酮及其同分异构体的简便方法。项目的研究极大地丰富了瓶尔小草属植物天然产物化学和生物活性信息，为阐明中药一支箭的药效物质基础和抗HBV中药的开发提供了重要参考。