VitA和TGFβ在腭裂诱发中的相互作用及机制

VitA和TGFβ在胚胎发育中存在相互作用，目前尚不清楚二者相互作用的分子机制。我们在前期工作中发现，转录抑制因子TGIF在VitA途径中的RARβ启动子上存在结合位点，结合量随VitA途径激活而减少，随TGFβ途径激活而增加；在TGIF缺失的情况下，二者之间的相互作用明显减弱；说明TGIF在二者相互作用中起着重要协调作用，但需进一步阐明其协调作用机制，为此，我们继续以腭裂为切入点，借助体内外模型和分子生物学技术，揭示TGIF在二者间的协调作用机制、以及在不同组织中其协调机制有无不同，并阐明TGIF在腭裂诱发过程中的调节功能和分子病理学特征。其次，在VitA缺乏的孕鼠血清中，我们发现VitA和TGFβ存在正相关性，二者联合检测可预测胎鼠畸形发生率，目前未见孕妇血清中二者关系的相关报道，为此，本立项的另外一个研究目标是明确二者在孕早期妇女血清中的相关性。研究资料可为围产期保健提供理论指导。

我们在前期工作中发现，转录抑制因子TGIF在VitA途径中的RARβ启动子上存在结合位点，结合量随VitA途径激活而减少，随TGFβ途径激活而增加；在TGIF缺失的情况下，二者之间的相互作用明显减弱；说明TGIF在二者相互作用中起着重要协调作用，但需进一步阐明其协调作用机制，为此，我们以腭裂为切入点，借助体内外模型和分子生物学技术，揭示TGIF在二者间的协调作用机制、以及在不同组织中其协调机制有无不同，并阐明TGIF在腭裂诱发过程中的调节功能和分子病理学特征。结果及结论：①使用腭上皮细胞迁移模型，发现如果RA通过抑制TGF-b/Smad信号途径对细胞迁移、MMPs蛋白起着抑制作用，并对间充质细胞的软骨分化作用起着抑制作用，促进其成骨过程。使用特异性siRNA敲除TGIF，与相应对照组相比，RA或TGF1对彼此的软骨分化、细胞迁移、或关键基因蛋白蛋白水平的调节作用明显减弱，提示TGIF在上皮组织细胞中也对二者起着关键协调作用。②在次生腭发育过程中，TGIF与RARα及β在间充组织中共同表达，过量atRA抑制TGIF的表达。BrdU免疫组化染色表明，atRA抑制胎鼠腭间充质观察细胞增殖；TUNEL结果显示过量atRA诱导间充质细胞凋亡。③借助胎鼠腭间充质细胞软骨分化模型和胎鼠腭上皮组织细胞迁移模型，用RA或TGF1处理培养体系，对TGIF的蛋白表达水平做定量分析，依据量的变化，证实TGIF是二者间的一个关键协调因子。④对2200份孕妇血清标本分析显示，在维生素A不足和缺乏情况下，Treg细胞因子、TGFβ和IL-10明显降低。妇女缺乏维生素A，其胎盘组织中Treg细胞转录因子FOXP3和视黄酸受体（RXR）的表达有所下调，血清中的免疫因子有所降低。其次，VitA缺乏往往与铁、锌和VitB2及叶酸缺乏并存，但是没有发现与出生缺陷的发生率存在相关性。