LSCLS与DCG协同靶向治疗非小细胞肺癌研究

治疗NSCLC迫切需要新方法。.选择厌氧菌靶向肿瘤使其凋亡和溶瘤是一种新策略。梭状芽孢杆菌对肿瘤内缺氧环境具有靶向性，在人和动物模型中表现出显著的溶瘤作用。我们在前期的实验中，优选出治疗肺癌的梭状芽胞杆菌衍生菌C.ghonii(DCG)，它显示出良好的特异性、安全性和有效性。但在肿瘤富氧边缘衰减常导致溶瘤不完整。另有研究表明肿瘤瘤体内具有Warburg效应，通过干预糖酵解代谢途径来治疗恶性肿瘤是一新热点研究方向。本研究拟利用兼性厌氧沙门菌所具有的穿透实体肿瘤的特性，新建一个L-乳酸依赖的沙门菌衍生菌携带CD147/LHDA shRNA(LSCLS),通过干扰NSCLC的"有氧糖酵解"代谢途径中乳酸脱氢酶A和CD147分子，扰乱肿瘤的关键代谢，导致肿瘤富氧边缘细胞凋亡；再联合DCG，以期对肿瘤的乏氧和富氧处协同破坏，达到治疗NSCLC的目的，进而研究其作用机理，为肿瘤治疗探讨一种新方法。

1. 背景：治疗NSCLC迫切需要新方法。选择厌氧菌靶向肿瘤使其凋亡和溶瘤是一种新策略。梭状芽孢杆菌对肿瘤内缺氧环境具有靶向性，已在人和动物模型中表现出显著的溶瘤作用。我们在前期的实验中，优选出治疗肺癌的梭状芽胞杆菌衍生菌C.ghonii，它显示出良好的特异性、安全性和有效性。但在肿瘤富氧边缘衰减常导致溶瘤不完整，且在晚期NSCLC中未证实。另外，研究表明肺癌瘤体内部具有Warburg效应，通过干预糖酵解代谢途径来治疗恶性肿瘤的策略正备受关注。本研究拟利用兼性厌氧沙门菌所具有的穿透实体肿瘤的选择厌氧菌特性，新建一个L-乳酸依赖的沙门菌的衍生菌携带CD147-LHDA shRNA,通过干扰非小细胞肺癌的“有氧糖酵解”代谢途径中乳酸脱氢酶A和CD147分子，扰乱肿瘤的关键代谢，导致肿瘤富氧边缘细胞凋亡。我们将DCG与依赖L-乳酸的沙门菌衍生菌携带CD147/LHDA shRNA两者联合应用于荷瘤小鼠，以期对肿瘤的乏氧和富氧处协同破坏，达到治愈非小细胞肺癌的目的。2. 研究内容：经筛选、设计构建严格依赖L-乳酸生长携带shRNA的沙门菌衍生菌；建立鼠D122和人肺癌细胞株A549的体外模型；评估L-乳酸依赖携带CD147/LHDA shRNA的沙门菌衍生菌治疗肺癌的体内效果模型；然后评估DCG治疗肺癌的小鼠体内肿瘤溶瘤作用；评估在体内L-乳酸依赖的沙门菌携带LDHA shRNA抑制LDHA的表达的效果；评估在体内L-乳酸依赖的沙门菌携带CD147 shRNA抑制CD147的表达的效果；评估DCG与L-乳酸依赖携带CD147/LHDA shRNA的沙门菌衍生菌联合应用，靶向治疗肺癌的效果及对机体的影响。3. 重要结果：获得沙门菌衍生菌VNP20009、目的质粒pEGFP- Intron；构建D122和A549的体内外模型，评估L-乳酸依赖携带pEGFP- Intron的治疗肺癌的肿瘤细胞凋亡，沙门菌衍生菌VNP20009产生紫色杆菌素并抑制A549细胞。4. 关键数据及其科学意义：本研究对VNP20009携带pEGFP- Intron治疗A549肺癌的体内外效果进行评价，实验设计的pGFP-intron 结构成功转染入A549肺癌细胞系中，并成功完成2个基因的敲除，提示多基因干扰技术可以同时完成。对肺癌细胞的代谢产生影响。