蠕形螨感染在眼表慢性炎症中的免疫损伤研究

Our published study showed that demodex mites are implicated with inflammatory ocular surface diseases. Our results also indicated that immunoinflammatory response is involved in the pathogenesis of ocular demodicosis. To investigate the underlying immunoinflammatory mechanixm in ocular demodicosis, tear, ocular surface epithelium, and serum will be collected and undergone following tests. Esophagus cells, macrophages cells, Th1、Th2、Th17 cells distribution in ocular suface and serum will be checked by FCM,confocal,and pathohistology detection. Demodex related B oleronius 62-kDa and 83-kDa protein will be extracted. The concentration of such protein and the reactivity to these antigen will be measured by Western blot and ELISA in the tear and serum. Real time PCR will be run in tear, ocular surface epithelium and serum to measure the expression of HLA-Cw2, HLA-Cw4、TLR-2. The correlation between those aforementioned immnunoinflammatory measures and ocular demodicosis severity will be further analyzed.

前期研究显示蠕形螨感染与常见的眼表慢性炎症相关，免疫反应可能是其重要的致病环节。本研究拟通过流式细胞胞内因子染色、共聚焦双染和组织学检测患者和对照的泪液、眼表上皮细胞和外周血中嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、Th1、Th2、Th17细胞的数量和分布，确定眼表蠕形螨感染诱发的非特异细胞反应和抗原特异性Th细胞的变化规律；通过免疫印迹和ELISA检测泪液和外周血中蠕形螨携带的B oleronius 62-kDa 和83-kDa 蛋白抗原水平及其抗体，进一步从分子水平阐明蠕形螨感染诱发的局部和全身体液免疫反应；通过Real-time PCR检测泪液、眼表上皮细胞和外周血中HLA-Cw2, HLA-Cw4和TLR-2的表达，从分子水平确定蠕形螨在眼表诱发免疫炎症的遗传背景差异性；分析上述免疫指标与蠕形螨计数、炎症程度之间的相关性，最终初步确定眼表蠕形螨感染致病的免疫损伤机制。

近年来，蠕形螨在眼部的致病性逐渐受到关注，但其致病性一直存在争议。. 本课题组从几个方面开展了研究：. 一、发现了眼部蠕形螨感染与一系列眼表炎症，如霰粒肿、MGD、角膜炎的相关性。对照研究发现，霰粒肿和MGD、角膜炎患者睫毛镜检蠕形螨检出率显著高于对照组；蠕形螨阳性者术后复发率显著升高,杀螨治疗可减少术后复发。杀螨治疗可抑制睑板腺的破坏。. 二、通过RT-PCR检测组织标本中蠕形螨的核酸片段，发现疾病组蠕形螨核酸片段阳性率显著高于对照组。. 三、检测患者外周血和泪液、结膜印迹标本对蠕形螨携带的B oleronius62-kDa 和83-kDa 蛋白抗原的反应性及其抗体水平。结果显示该反应性与眼表炎症程度相关，提示免疫反应参与了蠕形螨的致病。. 四、通过结膜印迹细胞技术和高通量测序分析了蠕形螨感染者眼表细菌、病毒、和真菌谱的改变，提示蠕形螨感染对眼表微生态产生显著的影响。. 五、通过共聚焦显微镜检查和泪液炎症因子分析，发现蠕形螨感染相关角膜炎症程度与皮脂螨高度相关，与蠕形螨携带的蛋白抗原分子反应性相关。主要细胞学改变为郎格汉氏细胞的浸润，支持了免疫反应在蠕形螨致病中的作用。. 六、结膜印迹和泪液中免疫因子的表达及与蠕形螨感染的相关性。结果显示炎症因子的表达与蠕形螨感染量及眼表炎症程度相关。. 七、对外周血中嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、Th1、Th2、Th17细胞数量进行分析，同时通过RT-PCR检测泪液，印迹细胞及外周血中HLA-Cw2，HLA-Cw4及TLR-2水平，初步结果显示Th1 shift。. 上述系列研究提示蠕形螨感染很可能是眼表一系列常见疾病的重要病因，其致病机制可能是通过诱发局部和全身针对蠕形螨相关蛋白抗原的免疫反应、上调炎症因子的表达、影响了眼表微生态而致病。研究结果为一系列常见眼表疾病的诊断和治疗提供了新的思路。已完成5篇论文撰写，其中发表2篇SCI，一篇中华系列；应邀在多个国际学术会议发言；培养研究生3名。