脓毒症后不同阶段大鼠单核细胞功能变化的机制研究

脓毒症后单核细胞的功能状况在很大程度上决定了宿主的免疫反应性，因而研究脓毒症后单核细胞功能的变化及其机制意义重大。目前，有关脓毒症期间单核细胞功能变化的研究大多局限于单个或多个分子，尚无采用微矩阵技术系统分析单核细胞基因表达变化的研究。本项目拟动态分析脓毒症后大鼠体内促炎、抗炎因子的变化，并结合单核细胞功能的改变，将脓毒症病程划分为SIRS、MARS以及CARS期，进而采用微矩阵技术系统分析各期大鼠外周血单核细胞基因表达的差异，继而寻找与单核细胞炎症调控以及功能变化密切相关的基因，从而探索脓毒症后单核细胞功能变化的机制，为脓毒症后免疫功能的调控提供理论依据。

目的 采用基因组学技术研究脓毒症患者SIRS期、CARS期外周血单核细胞基因表达的变化，以期探讨CARS期单核细胞功能障碍的机制。方法 抽取SIRS、CARS和健康人外周血20ml，每组8例，分离、纯化单核细胞后，取部分细胞行LPS反应性、吞噬和趋化功能检测。剩余细胞每组取106用于提取RNA，组内两两合并(n　=　4)，采用NimbleGen人全基因组表达谱芯片进行基因组学分析（12×123 K），并采用real-time PCR对部分基因进行验证。采用FDR矫正的P值（P <0.05）筛选SIRS与CARS组间的差异基因，采用Agilent GeneSpring软件（11.0版）对差异基因进行Pathway和GO分析。结果　与SIRS期患者或健康人相比，CARS期单核细胞内一系列参与促炎、吞噬、趋化以及抗凋亡的基因表达明显下调，而与促凋亡和抗炎症反应有关的基因表达则明显上调。当给予LPS刺激时，CARS 期单核细胞分泌促炎因子，如TNF-α和IL-6减少，但抗炎症介质IL-10则释放增加。功能检测显示，CARS期单核细胞吞噬和趋化功能下降，且人类白细胞抗原-DR表达下降（HLA-DR）。结论　CARS期，单核细胞在与吞噬、抗原递呈、炎症反应、细胞迁移和凋亡相关的基因表达方面发生了显著改变，这可能是CARS期单核细胞发生功能障碍的重要原因。.相关成果目录：1）发表SCI文章三篇2）培养硕士研究生1名。