补肾法、疏肝法提高卵母细胞质量与OSFs及其Smads信号通路的关系

前期基金项目提示，补肾法、疏肝法通过促进卵泡发育、抑制颗粒细胞凋亡、抗氧化损伤、调节细胞因子等具有提高卵母细胞质量的作用且影响机制有别。卵母细胞分泌因子（OSFs）的发现为评估卵母细胞质量提供了新的思路，Smads是OSFs下游信号转导分子。本项目拟进一步研究两法提高卵母细胞质量的作用，并通过两法对IVF-ET患者卵泡液和壁颗粒细胞及丘颗粒细胞、控制性超排卵小鼠卵母细胞及体外发育过程中卵母细胞的OSFs（GDF-9、BMP-15、BMP-6）mRNA及蛋白表达以及Smads信号通路（BMPR II、ALK2、ALK5、ALK6、Smad1、2、3、4、5、 8）的影响，研究两法提高卵母细胞质量与调控OSFs及其Smads信号通路的关系，比较两法提高卵母细胞质量作用环节之异同。这对于阐释中医调经种子的作用机制、丰富"肾主生殖"、"女子以肝为先天"的理论内涵、完善中医生殖理论具有重要的意义。

背景：我国不孕症发病率为7%-10%，IVF-ET是其主要治疗手段之一，但存在卵巢低反应，获得的卵母细胞少且质量差，妊娠率低且流产率高等问题。因此提高卵母细胞质量具有重要意义。主要内容：研究补肾法、疏肝法提高卵母细胞质量的作用；通过两法对IVF-ET患者卵泡液和颗粒细胞、控制性超排卵小鼠卵母细胞及体外发育过程中卵母细胞的OSFs（GDF-9、BMP-15、BMP-6）mRNA及蛋白表达以及Smads信号通路（BMPR II、ALK2、ALK5、ALK6、Smad1、2、3、4、5、8）的影响，研究两法提高卵母细胞质量与调控OSFs及其Smads信号通路的关系，比较两法作用异同。结果：临床研究1.两法均增加患者卵泡液及颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白含量及其基因表达，增加优质胚胎数，提高卵母细胞质量，并降低Gn用量，补肾法优于疏肝法。2.两法经GDF-9/Smad2/3信号通路促进卵母细胞发育；补肾法还可降低颗粒细胞凋亡率、提高卵泡液及颗粒细胞BMP-6蛋白及其基因表达，经BMP-15/Smad1信号通路改善卵母细胞质量。在体实验1.两法均可提高控制性超促排卵小鼠卵母细胞GDF-9、BMP-6和BMP-15蛋白及mRNA的表达，增加优质卵母细胞数量，提高妊娠率。2.疏肝法可通过提高小鼠卵母细胞BMP-15/Smads（BMPRⅡ、ALK-6）、BMP-6/Smads（BMPRⅡ、ALK-2/6）；补肾法通过BMP-15/Smads（ALK-6）BMP-6/Smads（ALK-2/6）信号通路提高卵母细胞质量。离体实验 1.两法均可能通过调控体外培养小鼠卵母细胞GDF9、BMP15、BMP6及其smad信号通路提高卵母细胞质量。2. 疏肝法主要调控Ⅱ型受体BMPRⅡmRNA及蛋白表达，补肾法主要调控Ⅰ型受体ALK5，ALK2、ALK6 mRNA及蛋白表达。3. 两法所用中药含药血清可通过影响培养人的卵巢颗粒细胞ACTA/Smads（ACTRIIB、ALK4 mRNA及蛋白）信号通路，提高卵母细胞质量，补肾法优于疏肝法。结论：补肾法和疏肝法均有提高卵母细胞质量的作用，其机制有同有异。意义：对于阐释中医调经种子的作用机制、丰富“肾主生殖”、“女子以肝为先天”的理论内涵、完善中医生殖理论具有重要的意义。