解毒祛瘀滋阴法通过miR-29b负调控sp1/DNMT1信号通路在SLE DNA低甲基化中的作用及机制研究

SLE is a typical autoimmune disease, resulting in serious damage to multiple systems and organs. Glucocorticoid combined immunosuppressant was the primary therapeutic method clinically. Different sorts of side effects may occur if they were long-term used. The leading man of our subject summarized the Jieduquyuziyin method to treat SLE, which was fully approval in clinical. DNA hypomethylation was considerd the crucial cause of SLE. We had confirmed that Jieduquyuziyin method could alleviate the disease by improving the level of DNA hypomethylation significantly to reduce immune-related genes. New research shows that microRNAs played a important role to maintain DNA methylation. We hypothesized that Jieduquyuziyin method improved the level of SLE DNA hypomethylation by interventing miR-29b to regulate sp1/DNMT1 pathway. In this research, we plan to use MRL/lpr mice and SLE CD4+T cells and human Jurkat cells to conduct some relevant experiments for providing new ideas for clinical treatment of SLE.

系统性红斑狼疮（SLE）是典型的自身免疫性疾病，可引起多系统多脏器损害，临床治疗以糖皮质类激素联合免疫抑制剂为主，长期使用会产生许多毒副作用。平台学科带头人依据多年临证经验，总结出治疗SLE的解毒祛瘀滋阴法，经临床验证，疗效得到充分肯定。DNA低甲基化是SLE发生发展的重要原因，前期数据表明，解毒祛瘀滋阴法能显著改善SLE DNA低甲基化水平，减少下游多种自身免疫相关基因的表达，从而缓解病情。最新研究显示，microRNA的表达对DNA甲基化起着重要作用，我们推测，解毒祛瘀滋阴法可以通过干预miR-29b负调控sp1/DNMT1信号通路表达从而改善DNA低甲基化水平，达到缓解SLE的作用。本课题中，我们拟通过MRL/lpr小鼠、SLE患者CD4+T细胞以及人Jurkat细胞，进行相应的分子学实验，探讨解毒祛瘀滋阴法对SLE DNA低甲基化的上游信号通路调节，为临床有效治疗该病提供新思路。

系统性红斑狼疮（SLE）是典型的自身免疫性疾病，可引起多系统多脏器损害，临床治疗以糖皮质类激素联合免疫抑制剂为主，长期使用会产生许多毒副作用。平台学科带头人依据多年临证经验，总结出治疗SLE的解毒祛瘀滋阴法，经临床验证，疗效得到充分肯定。DNA低甲基化是SLE发生发展的重要原因，前期研究表明，解毒祛瘀滋阴法能显著改善SLE DNA低甲基化水平，减少下游多种自身免疫相关基因的表达，从而缓解病情。最新研究显示，microRNA的表达对DNA甲基化起着重要作用，我们推测，解毒祛瘀滋阴法可以通过干预miR-29b负调控sp1/DNMT1信号通路表达从而改善SLE DNA低甲基化水平。本研究采用MRL/lpr小鼠作为自发性SLE动物模型，以C57BL/6J小鼠作为正常对照，在体实验观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠CD4+ T细胞内miR-29b、下游sp1/DNMT1信号通路及DNA甲基化的作用；然后，制备解毒祛瘀滋阴方冻干粉，运用小分子RNA转染技术干预Jurkat细胞中，体外实验观察其下游sp1/DNMT1信号通路及DNA甲基化的变化。结果显示，给药后，与模型组比较，中药组小鼠尿蛋白下降，血清dsDNA抗体、TNF-α、TGF-β水平降低，IL-2水平升高，小鼠肾脏病理损伤明显改善，外周血Treg比率升高。中药组小鼠脾脏CD4+ T细胞中miR-29b表达水平明显下降，sp1、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平明显升高，CD11a、CD70 mRNA和蛋白表达水平下降。在小分子RNA转染技术干预Jurkat细胞后，发现miR-29b表达被抑制时，sp1、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平明显升高，CD11a、CD70 mRNA和蛋白表达水平下降；miR-29b高表达时则相反。而解毒祛瘀滋阴方干预后，sp1、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平得到提升，而CD11a、CD70mRNA和蛋白表达水平则受到抑制。因此认为，解毒祛瘀滋阴方可能是通过下调miR-29b水平，上调sp1、DNMT1 mRNA和蛋白表达，升高CD4+ T细胞DNA甲基化水平从而起到改善SLE的作用，提示miR-29b可能是解毒祛瘀滋阴方的作用靶点，为临床有效治疗SLE提供新的思路。